Японский метод определения пола: Как пользоваться японской таблицей определения пола ребенка. Японский календарь определения пола ребёнка

Содержание

Как пользоваться японской таблицей определения пола ребенка. Японский календарь определения пола ребёнка

Можно ли на стадии планирования «заказать» себе мальчика или девочку? Японские учёные уверены, что это абсолютно реально, даже календарь уникальный изобрели. Попробуем спланировать пол малыша?

Японский календарь определения пола ребёнка — один из разнообразных способов узнать, кто в «домике» живёт — мальчик или девочка. Вы спросите, зачем нужно заниматься такого рода гаданием, если существует плановое ? Действительно, точнее ещё ничего не придумано, но японская таблица определения пола ребёнка — вещь незаменимая для многих ещё до беременности.

Преград для научных и околонаучных решений для жителей Страны восходящего солнца не существует. Пока все остальные утверждают, что определить заранее, какой набор хромосом получит ребёнок, невозможно, японцы доказывают на практике, что это совершенно не так.

Вряд ли этот метод можно назвать панацеей, но он достаточно популярен наряду с другими нестандартными попытками угадать .

Экспертное мнение

Вера Шибалкина , врач ультразвуковой диагностики, эксперт клиники «Гиппократ»:

«Всевозможные методы определения пола будущего ребёнка, за исключением УЗИ, не что иное, как развлечение и азарт. С научной точки зрения, то достоверности данная таблица практически никакой не несёт, научное сообщество в большинстве своём уверено, что определить заранее, какой хромосомный набор получит ребёнок, невозможно. Поэтому японские таблицы — это развлечение до прихода на УЗИ»

Принцип действия японского календаря определения пола ребёнка

Ещё в школе мы узнали: в деле «получения» мальчика или девочки всё решает набор хромосом, а зависит многое от мужчины и его сперматозоидов, потому что они являются носителем одновременно двух видов хромосом Xи Y- мужских и женских. В отличие от женщины, у которой присутствуют только X-хромосомы. И если произойдёт слияние мужской хромосомы X с женской X(XX) — родится девочка. В случае же если мужская Y-хромосома повстречается с женской X(XY) — на свет появится мальчик.

По мнению разработчиков календаря, в течение года выработка гормонов Xи Yв мужском организме происходит с большей силой или примерно одинаково. Поэтому вполне возможно. Используйте японский тест на определение пола ребенка.

За непродолжительное время японский метод обрёл удивительную популярность и среди жителей Японии, и далеко за её пределами. Мнения разделились — у кого совпало, те уверены, что метод даёт 100% результат, другие больше доверяют более достоверным методам, например, УЗИ.

Японские таблицы для определения пола ребенка

Японский календарь определения пола ребёнка — это две таблицы. Узнаём месяц рождения избранника, вспоминаем свой и по первой смотрим кодовое число.

Как работает японский метод планирования пола ребенка: например, будущий папа родился в июне, а месяц рождения мамы — август. Находим пересечение в таблице. В данном случае получаем число 12. Потом с этим кодовым числом отправляемся за ответом ко второй таблице. Вот


Здесь в верхней горизонтальной точке находим полученную цифру — кодовое число. А под ней столбец с названием месяцев зачатия малыша. Если беременность уже случилась, то в таблице под кодовым числом нужно найти месяц, когда произошло зачатие. Но можно и подгадать рождение ребёнка определённого пола — выбрать месяц.

В любом случае всё решают крестики в таблице, располагающиеся напротив каждого месяца. И чем их больше, тем больше вероятность зачатия ребёнка указанного пола. По одному крестику в столбце «мальчик» и «девочка» означает, что шансы на появление сына или дочки равны.

Пример

Будущий папа родился в январе, а мама в мае. Они встретились, и появилось число 1. А теперь только им решать, стараться над вопросом зачатия в мае — чтобы родился мальчик (максимальное количество крестиков в таблице 2 напротив столбца под кодовым числом). Или «дотянуть» до октября, если очень хочется девочку.

В статье подробно описано, как по таблицам китайского и японского календаря определить, какого пола у вас будет ребёнок.

Не все родители заранее планируют, кто у них будет девочка или мальчик. Да и не каждый поверит, что такое возможно запланировать. Но существуют древние методы, с помощью которых можно зачать ребенка желаемого пола. Жаль, что не всегда эти методы действенны и не дают стопроцентного результата.

Хотя, в большинстве случаев с помощью китайского или японского календаря можно составить прогноз на будущее. Давайте узнаем, как пользоваться таблицами, чтоб узнать пол будущего новорожденного.

Китайский календарь определения пола ребенка на 2019-2020 год

Самым надежным медицинским методом определения, кто родится у будущей мамочки, является ультразвуковая диагностика. Уже на ранних сроках беременности устанавливается пол крошки. Но, как же запланировать, чтобы через девять месяцев родился именно мальчик или девочка?

Более двух столетий назад в Китае для рождения наследника в знатной королевской семье была использована таблица. Очень интересно, что расчеты по той таблице-календарю совпали, как бы иронически к ним не относились скептики. И самое неожиданное, что именно в Китае на сегодняшний день запрещено беременным проводить тестирование на пол будущего малютки.



Пол будущего ребенка — китайская таблица

Китайская таблица — это и есть календарь, по которому можно заранее запланировать пол новорожденного. Этот древний манускрипт нашли археологи в Пекине. Чтобы быть точнее — его обнаружили в том месте, где был похоронен известный китайский император.

Данная табличка придумана древними мудрецами. В ней учитываются фазы луны и некоторые особенности женщин, а именно — смена крови в их организме, которая происходит каждый месяц. По мнению этих ученых мужей именно ежемесячный менструальный цикл и влияет на то, кто будет у будущей мамочки — девочка или мальчик.


ВАЖНО: По китайским меркам возраст новорожденных исчисляется по-другому. Если у нас на момент рождения ребёнку — 0 месяцев, то в Китае — уже семь или девять месяцев. Там возраст рассчитывается с момента зачатия.

Что представляет собой китайский календарь?

  • В этой табличке имеется 336 клеток, в каждой этой ячейке указан пол будущего новорожденного: «Мальчик», «Девочка»
  • По вертикали написаны числа — это полный возраст будущей роженицы. Чтобы предположения в будущем были точнее, учитывайте, что к возрасту надо прибавлять семь-девять месяцев (об этом мы говорили выше)
  • Ещё по китайским правилам — детородный возраст дам начинается с восемнадцати лет и заканчивается в сорок пять лет. Именно эти цифры и идут по вертикали
  • По горизонтали указаны месяца. Если вы желаете сына, то выбирайте ячейку с «М» — что означает мальчик. Смотрите, в каком месяце по таблице у вас выходит мальчик, в том месяце и старайтесь зачать кроху


Как правильно пользоваться таблицей?

Пользоваться календарем довольно-таки просто, ведь китайцы всегда славились изобретениями, которые просты в эксплуатации. Так и в данном календаре сможет разобраться любая мамочка, ведь для этого не обязательно решать логарифмические функции.

Рассмотрим на примере:

  • ПРИМЕР : Сейчас девушке 23 года 6 месяцев. Считаем возраст будущей мамы от момента зачатия: 23 года 6 месяцев + 9 месяцев, получается 24 года 3 месяца. Смотрим календарик по вертикали — ищем число 24. Нашли, теперь смотрим по горизонтали, в каком месяце — девочка, в каком — мальчик. Если родители мечтают о девочке, то благоприятные месяцы для зачатия крошки с августа по декабрь

ВАЖНО: В календаре имеются погрешности. Именно зачастую из-за этого предсказания не сбываются. Особенно, это бывает тогда, когда ребёнок зачат в самом начале, конце месяца.

Японский календарь определения пола ребенка

В Японии бездетность считается большой бедой для семьи. А когда японская женщина рожает одних лишь девочек, то это невезение для мужчин. Ведь по их законам каждый уважаемый мужчина должен иметь сына-наследника.


Некоторые семьи ради этого решались даже усыновить ребёнка, чтобы только получить наследника. А мужчины изменяли своим женам, надеясь, что любовница родит сына.


Проблема появления наследника на свет издавна считалась в Японии одной из самых важных. Многие мудрецы задумывались, как можно разрешить её. И придумали простой, действенный метод, который эффективен в 89% из ста — японский календарь.


Японская таблица определения пола ребенка на 2019 и 2020 год

Определить пол крошки по японскому календарю сравнительно не трудно. Для этого надобно лишь знать месяц рождения мужчины, женщины. Затем найти точку их пересечения в предложенной таблице. В этой ячейке (точке пересечения) будет указана цифра. Запомните её.


Перейдите ко второй таблице. Найдите то число в нижеприведенной схеме. Потом месяц зачатия плода. На пересечение этих двух данных найдете пол вашего ребенка.


Чтобы все было наглядней, давайте рассмотрим пример

  • Будущая мама родилась в мае, а папа — в сентябре. Смотрим первую табличку, ищем цифру, где пересекаются эти месяца. В ячейке указано число — девять
  • Переходим ко второй схеме. В вертикальном столбце ищем число девять, а в горизонтальном месяц зачатия, например — июль. Получается, что у вас будет мальчик


Конечно же, эти методы определения пола малышей не дают на все сто процентов точный результат. Однако не нужно отчаиваться. Самое главное, чтобы ваша крошка родилась здоровенькой, а родители окружили малютку заботой, вниманием, любовью.


Видео: планирование пола новорожденных по китайскому календарю

Узнать пол ребенка женщина может на 4-5 месяце беременности . Но всегда хочется заранее определить, кто появится на свет: мальчик или девочка?

У каждого народа существует множество примет определения пола ребенка, а в некоторых странах даже разработаны особые календари.

В Японии большое значение придается семейным традициям. Однако существование «клана» невозможно, если нет наследника. Поэтому вопрос рождения мальчика невероятно важен для каждого жителя страны Восходящего солнца. Отсутствие детей мужского пола существенно снижает социальный статус главы семьи.

До сих пор в Японии принято усыновлять мальчиков, родных по крови, но рожденных от родителей, стоящих ниже по положению или материальному достатку. Таким образом, аристократические семейства решают проблему с наследованием имущества, главенствующего положения, традиций.

Мальчиков, рожденных от любовниц, мужья принимают в семью на правах законных детей, а с женами, неспособными зачать младенца мужского пола, расстаются без сожалений.

Поэтому ученые Японии решили разработать оригинальный способ определения пола младенца по месяцам рождения родителей и времени зачатия.

Наука установила, что пол младенца полностью зависит от набора хромосом, доставшегося от обоих родителей. Если происходит слияние Х-хромосом папы и мамы, на свет появляется девочка. Если группа состоит из Х-хромосом мамы и Y-хромосом папы, рождается мальчик.

Ученые Японии утверждают, что продуцирование Х и Y хромосом в сперматозоидах регулируется и в определенный период времени количество нужных хромосом преобладает, что позволяет значительно увеличить шансы рождения младенца «планируемого» пола.

Удивительно, но японская таблица, позволяющая определить по зачатию пол ребенка, быстро обрела популярность даже за пределами страны Восходящего солнца. Возможно, данный метод заинтересует и родителей из России.

Как использовать японскую таблицу для определения пола будущего ребенка

Одна из причин популярности японского календаря – простота использования. Не нужно производить сложные математические расчеты. Достаточно знать месяц рождения папы, мамы и зачатия младенца.

Календарь состоит из двух удобных таблиц.

  1. В первой нужно запомнить цифру, расположенную в ячейке пересечения месяцев рождения будущих папы и мамы.
  2. Эту цифру необходимо найти в вертикальной строчке второй таблицы.
  3. В горизонтальной строке, соответствующей цифре, находят месяц зачатия.

Таблица 1

Месяц рождения будущей матери Месяц рождения будущего отца
янв фев мар апр май июн июл авг сен окт ноя дек
янв 1 5 9 1 5 9 1 5 9 1 5 9
фев 10 2 6 10 2 6 10 2 6 10 2 6
мар 7 11 3 7 11 3 7 11 3 7 11 3
апр 4 8 12 4 8 12 4 8 12 4 8 12
май 1 5 9 1 5 9 1 5 9 1 5 9
июн 10 2 6 10 2 6 10 2 6 10 2 6
июл 7 11 3 7 11 3 7 11 3 7 11 3
авг 4 8 12 4 8 12 4 8 12 4 8 12
сен 1 5 9 1 5 9 1 5 9 1 5 9
окт 10 2 6 10 2 6 10 2 6 10 2 6
ноя 7 11 3 7 11 3 7 11 3 7 11 3
дек 4 8 12 4 8 12 4 8 12 4 8 12

Таблица 2

1 2 3 4 5 6 мальчик девочка 7 8 9 10 11 12
янв х x
янв фев хххххx x
янв фев мар x хx
янв фев мар апр x x
янв фев мар апр май хx x
янв фев мар апр май июн x x
фев мар апр май июн июл x
мар апр май июн июл авг x xхх янв
апр май июн июл авг сен x янв фев
май июн июл авг сен окт хххххххххx x янв фев мар
июн июл авг сен окт ноя x x янв фев мар апр
июл авг сен окт ноя дек x x янв фев mар апр май
авг сен окт ноя дек x x янв фев мар апр май июн
сен окт ноя дек ххххx x фев мар апр май июн июл
окт ноя дек x xхххххххx мар апр май июн июл авг
ноя дек ххx x апр май июн июл авг сен
дек ххx x май июн июл авг сен окт
x x июн июл авг сен окт ноя
x x июл авг сен окт ноя дек
x авг сен окт ноя дек
x x сен окт ноя дек
хххххххx x окт ноя дек
x xхххх ноя дек
х хх дек

С помощью таблиц можно не только узнать, кто должен родиться, но и планировать время зачатия.

Пример определения пола по календарю

К примеру, мама родилась в апреле, папа – в феврале, а зачатие ребенка призошло в июне:

  1. В первой таблице отыскивают место пересечения двух строчек – апреля в графе «месяц рождения матери» и февраля в графе «месяц рождения отца».
  2. В нужной ячейке стоит цифра «8». Она необходима для работы со второй таблицей.
  3. В графе «число по таблице» отыскивают цифру «8». В горизонтальной строчке находят месяц июнь.
  4. Проводят визуально вертикальную линию. Заметно, что шансы рождения девочки и мальчика примерно одинаковы.
  5. по горизонтальной линии от цифры «8» находят месяц, в котором шанс рождения ребенка нужного пола будет наиболее высок. В этом случае в марте и октябре будет очень высок шанс зачать мальчика, а в апреле и декабре – девочку.

Проследив за графиком, можно заметить, что в некоторые месяцы кривая незначительно отклоняется в сторону. Следовательно, в это время зачатие может с равным успехом гарантировать рождение ребенка мужского и женского пола.

Насколько достоверна данная методика?

Считается, что данный метод способен прогнозировать пол ребенка с 80% успешностью.

Множество пар в Японии и прочих странах утверждают, что таблицы помогли им зачать ребенка нужного пола.

Однако не следует всецело доверять японскому календарю. Также как и , японская таблица имеет ряд погрешностей. Прежде всего, зачатие могло произойти на «стыке» двух месяцев. В этом случае таблицы уже не смогут дать правильный ответ.

Наука до сих пор не подтвердила утверждение, что в определенные месяцы в хромосомном наборе сперматозоидов преобладают X или Y хромосомы.

Правда, и опровержения этой теории пока не последовало. Поэтому японский календарь можно взять на вооружение, но подождать с выбором имени для младенца до получения результатов УЗИ.

Впрочем, какая разница, кто родится, мальчик или девочка? Если родители ждали этого ребенка, для них совершенно безразличен пол ребенка, главное, что на свет появилась дорогая кроха, к которой мама и папа испытывают бесконечную любовь.

Мальчик или девочка? Определяем пол малыша по японскому календарю

В статье будет рассмотрен один из самых популярных методов определения пола ребенка, которым успешно пользуются еще с периода древности и до сегодняшнего дня. Изобретен этот метод был в стране восходящего солнца, поэтому и получил соответствующее название: «Японский календарь».

Этап планирования ребенка проходит у всех родителей по-разному. Некоторые изучают и используют все возможные методы планирования пола будущего малыша, другие же предоставляют все воле случая. В любом случае, паре, которой уже удалось зачать малыша, бывает очень интересно узнать, кто у них родится: мальчик или девочка? Особенно в том случае, когда малыш «прячет» свой пол на УЗИ.

История японского метода определения пола ребенка уходит корнями в глубокую древность, когда для правителей рождение наследника мужского пола имело принципиальное значение, что было связано с возможностью продолжить династию правления. Если говорить о культурном менталитете японцев, стоит отметить, что рождение в семье именно мальчика считалось важным не только для императорских семей. Наличие сына напрямую определяло то положение, которое мужчина занимал в обществе.

Именно с этим связано создание японского метода планирования ребенка, который был разработан еще японскими мудрецами и лекарями много столетий назад. Интересно, что из древних времен традиция обязательного рождения и воспитания мальчика перекочевала в наши дни, из-за чего многие пары даже прибегают к усыновлению наследника в случае бездетности или рождения в семье только девочек. Поэтому японская таблица определения пола ребенка пользуется и до сегодняшнего дня значительной популярностью.

Японский календарь определения пола ребенка на 2018 год

Японский календарь представляет собой специальные таблицы, на основании данных которых возможно определить пол будущего ребенка, и даже спланировать зачатие мальчика или девочки, выбрав для этого «правильный» метод. Основной принцип, по которому построена таблица – это сопоставление месяца, в котором произошли (или произойдет) зачатие с датами рождения партнеров.

Принцип действия

Принцип, на котором основано действие японского календаря для определения пола, имеет вполне научное обоснование, подкрепленное открытиями таких областей знания как биология или генетика. Если обратиться к информации, изложенной еще в школьных учебниках, можно вспомнить, что пол будущего ребенка определяется в момент зачатия, и зависит от набора хромосом, полученных от родителей.

Женщина является носителем хромосом только X-вида, то есть хромосом, определяющих женский пол. Генетический набор мужчины включает хромосомы двух видов: Х и Y, таким образом, зачатие мальчика возможно при слиянии женской хромосомы Х-типа с мужской Y-хромосомой. В случае же, когда в момент зачатия женская яйцеклетка соединилась со сперматозоидом, несущим в себе Х-хромосому, пару ждет рождение малыша женского пола.

Расчеты, представленные в японском календаре определения пола, свидетельствуют о высоком уровне осведомленности, который имели японские врачи древности относительно процесса и генетических особенностей зачатия новой жизни. Ведь принцип действия таблицы основан именно на учете присутствия в ДНК мужчины хромосом X или Y-типа.

По мнению составителей календаря, организм человека подвержен гормональным изменениям в зависимости от времени года, в связи с чем в разные месяцы преобладание женских или мужских хромосом у мужчины может различаться. Изменяться может и восприимчивость женской яйцеклетки к соединению со сперматозоидами, несущими в себе разные типы хромосом. Таким образом, японский календарь определения пола имеет все шансы точно указать будущим родителям на пол их будущего ребенка.

Инструкция по применению

Японский календарь привлекает своей простотой и не требует проведения сложных математических расчетов. Он состоит из двух таблиц, работа с которыми осуществляется в следующем порядке.


Дата зачатия – это не дата, когда был сделан тест на беременность, и не дата задержки наступления менструации. Зачатие наступает в день овуляции, или же в течение 2-3 дней до и после нее. Овуляция у большинства женщин наступает спустя 2 недели после начала месячных. Таким образом, если зачатие было, к примеру, в конце марта, а тест на беременность женщина сделала после задержки менструации, в середине апреля, то месяцем зачатия следует считать именно март, а не апрель.

  1. Определив месяц зачатия, следует отыскать его во второй таблице (по горизонтали), и найти в таблице колонку пересечения с числом, полученным в первой таблице (числа расположены по вертикали). В полученной клетке будет находиться результат определения пола малыша.

Cегодня существует большое число версий японской таблицы определения пола. В некоторых из них обозначения мальчик/девочка представлены голубым или розовым цветом колонки, в других – крестиком или кружочком. Можно встретить даже таблицы, в которых нарисованы маленькие изображения мальчика или девочки. Не стоит пугаться такого разнообразия – независимо от оформления, принцип действия всех таблиц идентичен.

Метод планирования по датам рождения родителей

Если внимательно рассмотреть две таблицы японского календаря, можно сделать вывод о том, что он учитывает три фактора: дату рождения женщины, дату рождения мужчины и месяц зачатия. На основании даты рождения будущих родителей можно установить, что для любой пары существует ограниченное число месяцев в течение года для того, чтобы зачать ребенка желаемого пола. Таким образом, метод по датам рождения родителей будет также полезен парам, которые только планируют малыша и желают зачать мальчика или девочку.

Пример расчета


Лунный календарь зачатия 2018

При определении пола будущего ребенка наибольшую надежность дает сочетание сразу нескольких методов. Особенно это касается пар, только планирующих рождение мальчика или девочки. Использование лунного календаря не только поможет определить день, благоприятный для зарождения новой жизни, но и увеличит шансы на рождение ребенка определенного пола.

Для успешного применения лунного календаря необходимо следить за овуляцией, а в идеале планировать зачатие в те периоды, когда цикл женщины совпал с лунным плодородным циклом.

Если верить данным лунного календаря на 2018 год, шансы родить определенного пола таковы:

  • при расположении луны в таких знаках зодиака: Дева, Козерог, Телец, Скорпион, Рак – высок шанс зачатия девочки;
  • в случае зачатия в другие дни, пару ждет рождение мальчика.

По мнению астрологов, наиболее благоприятным днем для зачатия ребенка является день рождения женщины – в соответствии с лунным календарем, эта дата рассматривается как день для зачатия малыша с крепким здоровьем и хорошим характером.

Календарь зачатия мальчика или девочки на 2018 год

В отличие от китайского календаря зачатия, японский метод не привязан к возрасту родителей, что упрощает расчеты и делает его универсальным для каждого года. Также в японской таблице определения пола учитываются данные обоих родителей, что позволяет дать точный ответ на вопрос о том, кто родится у пары: мальчик или девочка. Мнения пар, уже испробовавших данный метод, различаются: одни уверены, что календарь абсолютно точен (как правило, это те пары, у которых пол одного или нескольких малышей совпал с данными таблицы). Другие же родители отдают предпочтение традиционным методам, обладающим высоким уровнем надежности – например, ультразвуковому исследованию.

Возможные погрешности

Японский календарь относят к прикладным методам, а значит, не обладает 100% научностью и точностью. Пары, только планирующие беременность, используя данный метод, могут повысить шансы на рождение ребенка желаемого пола. Если беременность уже наступила, эту методику можно использовать, как способ узнать пол будущего малыша, однако стоит быть готовым к тому, что УЗИ может показать другие результаты. Календарь имеет наибольшую степень погрешности в случае, когда зачатие произошли в «переходный» период – в самом начале или конце месяца. То же самое касается и даты рождения родителей.

Ранее мы писали о необычном способе определить пол ребенка, опубликовав , а сегодня мы хотим предложить нашим читательницам альтернативу – японский календарь зачатия ребенка на 2017 год.

В японских семьях большим несчастьем считалась бездетность, и когда японки рожали только девочек, это воспринималось как невезение для их мужей. По японским негласным законам каждая семья должна родить сына, который станет наследником.

Раньше некоторые японцы шли на усыновление ребенка, лишь бы иметь наследника, а мужья даже могли пойти на измену, в надежде получить сына от любовницы.

Так как эта проблема в Японии была одной из самых ключевых, то мудрецы страны Восходящего солнца задумались о ее разрешении. И впоследствии создали замечательный и почти точный метод определения пола ребенка, эффективность которого составляет 90% из 100% – японский календарь зачатия ребенка.

Начало 2017 года согласно Восточному календарю выпадает на 28 января. Теперь попробуем определить пол ребенка по японскому календарю зачатия. Достаточно знать месяц рождения мужа и жены, далее найти точку пересечения в таблице по этим датам (см. рисунок). Зафиксируйте в памяти эту цифру.

Затем откройте вторую таблицу и найдите в ней цифру, которую запомнили, а потом и месяц, когда был зачат малыш. При пересечении этих двух данных вы увидите предполагаемый пол ребенка.

Пример

У мамы день рождения в мае, а у папы в сентябре. По первой таблице находим цифру пересечений этих месяцев. Это цифра 9.

Теперь смотрим вторую табличку, ищем номер 9 в вертикальном столбике, и месяц зачатия, к примеру, июль – в горизонтальном. Видим результат – по японскому календарю зачатия 2017 года у пары предположительно будет мальчик.

Стоит помнить, что такой способ определения пола малыша не может гарантировать точного и стопроцентного результата, но не отчаивайтесь! Современные ультразвуковые исследования покажут более точные данные по полу вашего будущего малыша. Но самое главное – здоровье крохи, который так сильно нуждается в вашей любви, заботе и внимании.

Также, чтобы узнать, когда лучше рожать мальчика или девочку, обратитесь к лунному календарю, который показывает связь между возрастом мамы и месяцем зачатия.

Когда лучше рожать мальчика или девочку также подскажет лунный календарь зачатия в зависимости от месяца.

Мы желаем всем читательницам прекрасного материнства и здоровых, счастливых деток! Неважен пол ребенка, главное, чтобы он рос уверенным в том, что его любят уже только за то, что родился!

Японская таблица определения пола ребенка по возрасту матери

Фото: UGC

Возможно ли спрогнозировать пол ребенка? Этот вопрос люди пытаются решить не одно столетие. Современные родители не желают уповать на волю природы, поэтому ищут методы, с помощью которых можно запланировать пол малыша. В решении этого вопроса поможет японская таблица определения пола ребенка.

Японская таблица определения пола ребенка 2017

Все монархии, императорские и королевские династии были озабочены вопросом появления наследника мужского пола. Японские мудрецы помогли своим монархам, создав специальную таблицу определения пола ребенка.

В отличие от китайцев, которые создали календарь зачатия, основываясь на показателях возраста матери и месяца, наиболее благоприятного для формирования мальчика или девочки, японцы подошли к решению проблемы системно. Определение пола ребенка они соотнесли с:

  • возрастом отца и матери;
  • месяцем, когда происходит зачатие.

Эти сведения размещены в двух таблицах.

Читайте также: Казахские традиции и обычаи при рождении ребенка

Японская таблица определения пола ребенка: как пользоваться

Чтобы определить пол ребенка по японской системе, необходимо научиться ею пользоваться. Сделать это просто, если последовательно выполнить такие действия:

Шаг 1. В таблице 1:

  • по горизонтали в строке «Месяц рождения папы» найдите месяц, в котором родился отец будущего ребенка;
  • по вертикали (строка слева) отыщите месяц рождения мамы;
  • найдите место пересечения этих строк и запомните цифру, которая стоит в этой клеточке.

Шаг 2. В таблице 2:

  • отыщите в горизонтальной строке сверху цифру, которая стояла на пересечении месяцев рождения отца и матери младенца;
  • опускаясь ниже по вертикали, которая закреплена за этой цифрой, найдите месяц, на который планируете зачатие;
  • по центру таблицы размещены две колонки – «Мальчики» и «Девочки». Посмотрите, сколько крестиков стоит в строке запланированного месяца зачатия.

Чем больше их, тем вероятнее, что ребенок именно этого пола родится у пары, которая хочет зачать ребенка в конкретный месяц.

Рассмотрим эти вычисления на примере. Отец родился в марте, а мама — в июле. Цифра пересечения строк в первой таблице — 6. Эта пара планирует зачатие на октябрь. В этом случае 10 к 1, что родится наследник, потому что именно десятью крестиками отмечена колонка «Мальчик».

Принцип расчета, представленный в японской таблице, очень простой, а алгоритм вычислений — легкий. Воспользуйтесь мудростью предков, чтобы спрогнозировано родить девочку или мальчика.

Читайте также: Как узнать пол ребенка без УЗИ? Народные приметы

Оригинал статьи: https://www.nur.kz/health/motherhood/1710322-aponskaa-tablica-opredelenia-pola-rebenka-po-vozrastu-materi/

пол ребенка японский метод — 25 рекомендаций на Babyblog.ru


Во время половой близости во влагалище женщины попадает 300-500 миллионов сперматозоидов. В его кислой среде большая их часть гибнет, лишь самые стойкие попадают в шеечную слизь, имеющую слабощелочную реакцию, которая облегчает движение. Прежде чем добраться до яйцеклетки, сперматозоидам предстоит пересечь полость матки и попасть в маточную трубу. Этот путь они проделывают за 2-2.5 часа. По последним данным, их оплодотворяющая способность сохраняется в течение 2 суток.

Итак, яйцеклетку, попавшую в маточную трубу, быстро окружает армия сперматозоидов. Яйцеклетка всегда является носительницей половой Х-хромосомы, сперматозоиды же бывают двух видов: носители Х- и Y-хромосом. Если с ней сливается тот сперматозоид, что несет Х-хромосому, появляется эмбрион женского пола ( ХХ ), а если раньше него успевает носитель Y-хромосомы, возникает зародыш мужского пола ( ХY ). Это значит, что ответственность за пол будущего ребенка в буквальном смысле несет сперматозоид. А точнее, его хозяин — отец будущего ребенка.

Что еще влияет на пол ребенка?

Есть еще несколько обстоятельств, кроме вышеперечисленных, которые тоже могут повлиять на пол будущего ребенка. Например, есть семьи, где из поколения в поколение рождаются только мальчики или только девочки. Почему так бывает? Видимо, здесь существует какая-то генетическая предрасположенность к рождению детей одного пола. А возможно, все дело в особенностях спермы, которые влияют на количество сперматозоидов группы Х или Y.

Кроме того, как стало известно, сперматозоиды с Х- и Y-хромосомой различаются: несущие Х-хромосому несколько крупнее и двигаются медленнее тех, что несут Y-хромосому. Однако последние хоть и шустрее, но не отличаются стойкостью и быстрее погибают. Следовательно, те сперматозоиды, что несут информацию «на мальчика», быстрее достигнут места встречи, но, если эта встреча не состоится в течение 48 часов ( овуляции еще не было, и их еще не ждали ), они гибнут. А сперматозоиды, несущие информацию «на девочку», доберутся до цели медленнее, но, если овуляция уже произошла и яйцеклетка ждет ( а ждать она может, как мы знаем, не больше 24 часов ), встреча состоится.

Итак, если половая близость случилась перед овуляцией ( при нормальном цикле на 12-13-й день ), будущие родители имеют гораздо больше шансов получить девочку, так как быстрые Y прибегут раньше времени и не дождутся встречи-овуляции, а медленные Х окажутся на места как раз в срок, и образуется половая клетка ХХ.

Если же половая близость пришлась на момент овуляции или первые сутки после нее ( 14-15-й день нормального цикла ), то быстрые Y настигнут яйцеклетку первыми, и получится мальчик ( ХY ).

Определить пол будущего ребенка

Обычно специалисты могут определить пол будущего ребенка с конца 1-го триместра беременности. Существуют два метода, позволяющих определить пол будущего ребенка до его рождения: УЗ-исследование ( с 24-28 недели беременности, точность прогноза — около 85% ) и анализ околоплодных вод ( с 14-16 недели, но только по показаниям, например, чтобы исключить генетические болезни ).

Столь важная для родителей проблема, как пол будущего ребенка, конечно, обросла множеством примет, по большей части смешных. Существуют, однако, две приметы, на которые родители вполне могут положиться.

Приметы на пол ребенка
  • Обычно мамы девочек во время беременности меняются внешне. Маленькая кокетка уже в утробе претендует на мамины женские гормоны. Мальчиков же такие мелочи, как правило, не интересуют, и будущая мама хорошее с каждым днем.
  • Замечено, что мам девочек тошнит в начале беременности меньше, чем тех женщин, кто ожидает появления мальчика. Возможно, это явление объясняется тем, что к беременности девочкой женскому организму проще приспособиться.

А стоит ли вмешиваться в развитие событий, пытаясь повлиять на пол будущего ребенка? Как нам кажется, делать этого не стоит, ведь так мы можем нарушить естественное соотношение мужчин и женщин, необходимое для продолжения жизни на Земле.

Методы определения пола будущего ребенка

Определение пола ребенка. Зачем это нужно?

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОЛА РЕБЕНКА интересует каждую беременную женщину. Женщинам, никогда не имевшим счастья носить под сердцем ребенка, сложно понять такое ярое рвение будущих мам в определении пола будущего ребенка. Казалось бы, какая разница, кто родится — мальчик или девочка… Главное, чтобы здоровенький был. Да не тут-то было… Этого мало. Во-первых, определение пола ребенка — это очень интересный процесс. Особенно это относится к всевозможным сложным расчетам. Современные мамы отдают предпочтение подобным методикам. Некоторые даже согласны платить немалые суммы тем, кто владеет методикам определения пола будущего ребенка для того, чтобы точно знать, кто у них родится. Нередко их прогнозы являются точными. Но официальная наука до сих пор не признала ни один из этих способов определение пола ребенка на все 100% точным. Если мыслить логически, то процент попадания составляет 50/50. Попасть в «правильные» 50%, как сами понимаете, не так сложно.

Другие родители отказываются от определения пола будущего ребенка не только самостоятельно, но и на ультразвуковом исследовании. Тем родителям, которые не хотят заранее знать , кто у них родится, следует сразу предупредить врача, который будет проводить УЗИ о своем решении, чтобы специалист случайно не выдал «тайну». Ну и, конечно же, самим не вглядываться в монитор.

Определение заранее пола ребенка интересно и в связи с тем, что многие родители предпочитают покупать приданное для малыша заранее. И правильно делают. Но вот только — сильно в русском народе желание одевать мальчиков и девочек только в определенные цвета. И попробуйте только представить такую ситуацию. Методика по определению пола будущего ребенка дала результат, что у вас будете девочка. Вы накупили розовых распашонок, конвертик, одеяльце, коляску. А рождается мальчик… Многие родители предпочитают в таких случаях попробовать продать все, что приобрели и купить новое, «нужного» цвета. Так быть может, не стоило вообще заниматься заранее определением пола ребенка и покупать вещи нейтральных цветов? Или все же существует достаточно надежные методики?

Определение пола ребенка: медицинский метод.

Существует только один 100% способ определения пола ребенка еще до зачатия. Это система MicroSort. Смысл ее заключается в разделении сперматозоидов на «женские» и «мужские». Метод это непростой и довольно дорогостоящий. Пользоваться им для определения пола ребенка простым обывателям нецелесообразно. Скорее он используется для отсортировки «больных» эмбрионов. Эта методика с успехом используется у будущих родителей — носителей каких-то наследственных заболеваний, особенно тех, которые передаются лишь только по мужской или женской линии. К примеру, гемофилии. Это заболевание крови, которое встречается только у представителей мужского пола. В таких случаях определить пол ребенка необходимо по медицинским показаниям.

Мало того, что само определение пола сперматозоида ( если так можно выразиться ) и, соответственно, будущего ребенка, процедура не из дешевых, так еще и беременеть придется при помощи ЭКО. А беременность при таком методе наступает обычно не с первой попытки.

Определение пола ребенка по дате зачатия ( дате полового акта ).

Известно, что забеременеть женщина может только в определенные дни менструального цикла. А именно, в период овуляции — выхода зрелой яйцеклетки из яичника. Полученные знания женской физиологии помогают женщинам не только добиться быстрого наступления беременности, но и определить пол ребенка еще до зачатия при помощи несложных расчетов. Каким образом происходит определение пола будущего ребенка по данной методике?

Сперматозоиды способны выживать в женских половых органах до 96 часов. Оплодотворение происходит примерно в середине менструального цикла. Точную дату овуляция ( она нужна для определения пола будущего ребенка ) можно узнать при помощи ультразвукового исследования, ежедневного измерения базальной температуры, использования специальных тестов.

Теперь самое главное. Сперматозоиды носители Y хромосомы ( мужские ) «живут» меньше, чем носители только X хромосомы ( женские). Поэтому вероятность зачатия мальчика резко увеличивается в дни овуляции. Это наблюдение полезно не тем, кто пытается определить пол ребенка перед зачатием, а скорее уже беременным женщинам. Если они знают точную дату зачатия и овуляции, то можно спокойно определить пол ребенка. Но это тоже не 100% метод.

Диета помогает в определении пола будущего ребенка.

По заверениям некоторых специалистов диета может помочь в прогнозировании, определении пола ребенка. Диету эту нужно соблюдать в течение 2 месяцев до планируемого зачатия. Причем соблюдаться этот режим питания должен обоими будущими родителями. Данный метод надежен примерно на 80%.

Итак, если вы хотите родить мальчика, то вам необходимо употреблять больше мяса, картофеля, грибов, тропических фруктов. Но по возможности снизить количество молочных продуктов в своем рационе.

Тем же, кто мечтает о дочке нужно налегать на овощи, отказаться от экзотических фруктов и мясной продукции. Молоко и сладкие блюда поощряются.

Если вы уже беременны и мечтаете определить пол ребенка, то попробуйте проанализировать свой и мужа пищевой рацион. Если наблюдается преобладание тех или иных продуктов, то определение пола будущего ребенка не должно составить для вас труда.

Определение пола ребенка по обновлению крови.

Довольно интересно попробовать определить пол ребенка по обновлению крови. У мужчин кровь обновляется раз в 4 года, а у женщины — раз в 3 года. Если у женщины отрицательный резус фактор, то наоборот. Чья кровь «моложе», того пола ребенок и родится. Давайте попробуем определить пол ребенка этим неложным методом.

Итак, определение пола ребенка у женщины 25 лет и у мужчины 33 лет.

25:3=8.3

33:4=8.2

Таким образом, у мужчины кровь моложе — родится мальчик.

Определение пола ребенка по группе крови родителей.

Метод этот отвергается многими из-за своей, мягко говоря, нелепости. В табличках четко указано, что если у отца такая-то группа крови, а у матери такая-то, то родится мальчик ( или девочка ). Но ведь у многих родителей рождаются разнополые дети… Как тогда можно верить подобным методом определения пола будущего ребенка?

Если желаете определить пол ребенка по группе крови, то вот вам некоторые значения:

Мать I — Отец I — девочка

Мать I — Отец II — мальчик

Мать I — Отец III — девочка

Мать I — Отец IV — мальчик

Начиная со второй группы крови, у матери табличка повторяется, но наоборот, то есть начинается порядок исчисления с мальчика и чередуется. Третья группа крови у матери в табличке начинается с девочки. Четвертая — с мальчика.

Для определения пола будущего ребенка имеет значение и резус фактор его родителей. У «положительных» и «отрицательных» матери и отца родится девочка. У «разнорезусных» чаще рождаются мальчики. Но и с этим утверждением можно поспорить…

Определение пола ребенка по японскому календарю.

На пересечении ваших с партнёром месяцев рождений находите цифру. Теперь эту цифру найдите наверху второй таблицы. Теперь в столбике под ней найдите месяц зачатия. И смотрите какая вероятность зачатия мальчика и девочки в этом месяце:

Сложность этих методов определения пола будущего ребенка заключается в том, что большинство женщин не знают, в какой месяц у них произошла овуляции. Могут, например, только предполагать, что 31-1 июня. Но ведь разница для определение пола ребенка подобным методом получается значительна. Или еще лучше, когда не знаешь точно, в каком возрасте наступило зачатие. Такое может случиться если оплодотворение ( овуляция ) выпадает примерно на дату дня рождения у женщины.

Определение пола ребенка ( после зачатия ) народными методами.

Определить пол ребенка пытаются практически с самого момента его зачатия. «Знающие» люди сразу узнают у будущей мамы: а есть ли у нее токсикоз? И если ответ положительный, то сразу начинают утверждать, что ждать стоит девочку. В народе бытует мнение, что в период вынашивания именно девочки женщина «плохеет». «Дочка забирает красоту у своей матери». Токсикоз, появление угрей на лице и теле, выпадение волос, жирная кожа — все это связывают с тем, что женщина вынашивает дочь.

Также говорят, что если будущая мать постоянно хочет кушать мясо, соленые огурцы и колбасу, то стоит ждать мальчика, а если ее тянет на сладкое, то по определению, пол ребенка будет женским.

Немного позднее появляются еще более видимые признаки, по которым можно провести определение пола будущего ребенка — форма живота. Особенно это заметно после 30 недель беременности. Говорят, что если форма живота «остренькая», а сзади невозможно заметить, что женщина в положении ( то есть видна талия ), то родится мальчик. Если живот круглый и как бы расползается в стороны, то будет девочка.

Определить пол ребенка некоторые «знатоки» могут даже по внутриутробному поведению ребенка. Говорят, что если ребенок часто шевелится и не дает своей маме уснуть, то это точно хулиган — пацан. А если ведет себя спокойно, то это доченька.

Если же разобраться в таких методиках определения пола ребенка с медицинской точки зрения, то они абсолютно необоснованны и противоречивы. К примеру, форма живота к полу ребенка, то есть его определению никакого отношения не имеет. Это зависит только от положения малыша в матке, анатомических особенностей женщины и наличия/отсутствия у нее лишнего веса. А частоту шевелений необходимо считать не для определения пола будущего ребенка, а для того, чтобы вовремя заметить неблагополучие в состоянии своего малыша. Слишком частые или редкие шевеления могут говорить о том, что плоду не хватает кислорода. Обычно для нормализации такого состояния бывает достаточно проветрить помещение, в котором находитесь или выйти прогуляться на чистый воздух.

Еще одним результатом народных «исследований» является такой способ определения пола ребенка. Чем старше мужчина ( будущий отец ) женщину ( будущую мать ), тем больше вероятность рождения у них мальчика. Если старше жена, то, скорее всего, на свет появится девочка.

Определение пола ребенка при помощи различных гаданий.

Мы склонны думать, что данные методики определения пола ребенка скорее станут развлечением для будущих мам, но несомненно они интересны. Истоки некоторых из них уходят своими корнями в древность.

Смочите мочой беременной женщины зерна ячменя и пшеницы. Если быстрее прорастет ячмень, то ждите мальчика, если пшеница — родится девочка.

Если будущая мать предпочитает начинать есть хлеб с горбушки, то у нее родится сын. А если берет из серединки — дочка.

Попросите беременную взять со стола ключ. Если она возьмется за круглую часть ключа, то родится мальчик. Если за основание — девочка.

Таблицы определения пола ребенка — Беременность

Чтобы соответствовать требованиям развития современного общества, все больше людей с особой тщательностью планируют свою жизнь. Одним из важнейших этапов в ней является планирование полноценной семьи, подготовка к материнству и отцовству. Большинство людей закладывают в свой план даже желаемый пол будущего члена семьи, пытаясь осуществить свои давние мечты, реализовать самые заветные желания или соблюсти традиции рода.

Однако интересоваться вопросом определения пола ребенка до родов начали еще с древних времен. Из поколения в поколение передается опыт народов мира. Эти знания являются своеобразной статистикой рождаемости мальчиков и девочек. Они опираются на множество фактов и признаков, которые имеют место в жизни будущих родителей еще до зачатия ребенка, во время зачатия, а также в период протекания беременности.

Всю массу информации начали структурировать еще несколько веков назад. Из-за этого появилось множество таблиц для определения вероятного пола потомков. В каком виде они дошли до нас, преодолев время и языковые барьеры, судить сложно. Однако пользуются ими в наше время достаточно активно.

Китайская таблица определения пола

Одной из самых популярных и распространенных в сети есть таблица, изобретенная в Китае почти тысячу лет назад. Принцип таблицы заключается в определении пола будущего малыша, ориентируясь на возраст матери и месяц зачатия. Сами же китайцы до сих пор считают, что этот принцип работает в 95% случаев.

История ее появления дошла до наших дней в нескольких вариантах, поэтому сложно достоверно утверждать вымышленные они или же настоящие. В одной из официальных версий говорится, что эту таблицу определения пола ребенка нашли в Пекине 7 веков назад. Найдена она была в могиле одного императора, императорской семьи или монаха. До сих пор таблица хранится в Пекинском институте наук. Ее создатель и способ, которым она была составлена, до сих пор остались тайной для всего мира.

По другой версии считают, что такая таблица не могла возникнуть в Китае в то время, ведь там не пользовались григорианским календарем. Лишь после 1900 года, точная дата неизвестна, китайцы начали его использовать. Многие исследователи считают первым днем григорианского календаря 20.11.1911 года.

Даже сами китайцы говорят о современном характере таблицы. Но не исключают того, что изготовленная она на основе древних календарей, в которых «Инь» и «Янь» означают «день» и «ночь», а также они означают женское и мужское начала.

Таблица, в том варианте, в котором она дошла до нас, состоит из указанных в горизонтальной строке месяцев года и указанных в вертикальной строке чисел, обозначающих общее количество лет будущей мамочки. Содержит она 12 месяцев и охватывает возраст женщин с восемнадцати до сорока пяти лет. Эта возрастная категория выбрана неслучайно. В Китае женщина от 18 до 45-ти считается детородной. Хотя у нас принято считать, что женщина должна родить до сорока лет, и все, что выходит за эти пределы, считается исключением. На пересечении этих строк находится 336 ячеек, в которых размещены буквы «Д» (девочка) и «М» (мальчик).

Есть несколько нюансов в использовании таблицы, в частности, выбирая возраст матери. Одни считают, что нужно указывать количество полных лет женщины на момент зачатия, а другие – на момент рождения ребенка. Лучше тем, у кого этот показатель не изменился за период беременности, но тогда непонятно, что же делать другим. Но есть положительные случаи, когда результат обоих вариантов указывает на рождение ребенка одного и той же пола.

ВОЗРАСТ МАТЕРИ МЕСЯЦ ЗАЧАТИЯ
   I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII
18 Д М Д М М М М М М М М М
19 М Д М Д М М М М М Д М Д
20 Д М Д М М М М М М Д М М
21 М Д Д Д Д Д Д Д Д Д Д Д
22 Д М М Д М Д Д М Д Д Д Д
23 М М Д М М Д М Д М М М Д
24 М Д М М Д М М Д Д Д Д Д
25 Д М М Д Д М Д М М М М М
26 М Д М Д Д М Д М Д Д Д Д
27 Д М Д М Д Д М М М М Д М
28 М Д М Д Д Д М М М М Д Д
29 Д М Д Д М М Д Д Д М М М
30 М Д Д Д Д Д Д Д Д Д М М
31 М Д М Д Д Д Д Д Д Д Д М
32 М Д М Д Д Д Д Д Д Д Д М
33 Д М Д М Д Д Д М Д Д Д М
34 Д Д М Д Д Д Д Д Д Д М М
35 М М Д М Д Д Д М Д Д М М
36 Д М М Д М Д Д Д М М М М
37 М Д М М Д М Д М Д М Д М
38 Д М Д М М Д М Д М Д М Д
39 М Д М М М Д Д М Д Д Д Д
40 Д М Д М Д М М Д М Д М Д
41 М Д М Д М Д М М Д М Д М
42 Д М Д М Д М Д М М Д М Д
43 М Д М Д М Д М Д М М М М
44 М М Д М М М Д М Д М Д Д
45 Д М М Д Д Д М Д М Д М М

Пользуются таблицей и на этапе планирования зачатия. Если женщина использует таблицу до или после зачатия, или уже даже после рождения ребенка, а половые отношения у нее были активными в период наступления беременности, то нужно, чтобы она знала точную дату овуляции. Только зная ее, женщина будет знать точную дату зачатия. Женщинам с нерегулярным менструальным циклом определить дату овуляции сложнее. Чтобы не ошибиться, нужно следить за своим организмом, в частности, ежедневно мерить базальную температуру. Считается, что после овуляции происходит скачок температуры, поднимается она примерно до 37-37.4 градусов.

Для определения точной даты зачатия используют несложную математическую формулу. Если цикл женщины составляет 28 дней, чтобы узнать точный месяц зачатия, к первому дню задержки месячных нужно добавить две недели. Если месячный цикл длится дольше, то нужно добавить еще и эту разницу, а если меньше, то нужно, соответственно, отнять. Именно это позволит определить месяц, который нужен для использования таблицы.

Стоит знать маленькую, но очень значительную деталь. Возраст матери за китайским календарем на 9 месяцев старше, чем за современным. Это очень важно, поскольку китайцы считают, что жизнь начинается сразу после зачатия. То есть все 9 месяцев вынашивания человек уже живет.

Японская таблица определения пола

Конкурирует с китайской японская таблица определения пола ребенка, ведь их цивилизация не менее развитая и наблюдательная. Для японцев с давних времен важно иметь детей, а главное для семьи – родить наследника. В целях планирования пола ребенка японские мудрецы создали специальную таблицу-календарь. Составили ее на основе знаний по астрологии и нумерологии.

Концепция японской таблицы кардинально отличается. Чтобы использовать ее не для планирования, а с целью определения пола уже зачатого ребенка, нужно знать месяца рождения обоих родителей и точный месяц зачатия малыша. Особое внимание мать должна уделить определению точной даты зачатия, зная дни своей овуляции.

Этой таблицей пользоваться немного сложнее, чем китайской, ведь состоит она из двух частей: в первой части определяется кодовое число, которое удастся расшифровать во второй части.

Часть 1

Кодовое число находится на пересечении месяцев рождения биологических матери и отца ребенка. В вертикальном столбце слева нужно отыскать месяц рождения матери и провести от него линию вправо по горизонтали до ячейки, которая находится напротив месяца рождения отца.

МЕСЯЦ РОЖДЕНИЯ ЖЕНЩИНЫ МЕСЯЦ РОЖДЕНИЯ МУЖЧИНЫ
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII
I 1 5 9 1 5 9 1 5 9 1 5 9
II 10 2 6 10 2 6 10 2 6 10 2 6
III 7 11 3 7 11 3 7 11 3 7 11 3
IV 4 8 12 4 8 12 4 8 12 4 8 12
V 1 5 9 1 5 9 1 5 9 1 5 9
VI 10 2 6 10 2 6 10 2 6 10 2 6
VII 7 11 3 7 11 3 7 11 3 7 11 3
VIII 4 8 12 4 8 12 4 8 12 4 8 12
IX 1 5 9 1 5 9 1 5 9 1 5 9
X 10 2 6 10 2 6 10 2 6 10 2 6
XI 7 11 3 7 11 3 7 11 3 7 11 3
XII 4 8 12 4 8 12 4 8 12 4 8 12

Например. Если мать родилась в марте (III), а отец в ноябре (XI), то кодовым числом будет число 11.

Часть 2

Во второй части японской таблицы непосредственно можно узнать пол будущего ребенка. Она состоит из 12 вертикальных колонок, разделенных в центре еще двумя колонками «Мальчик» / «Девочка». Каждая из ячеек этих двух центральных колонок заполнена разным количеством крестиков – «X». В некоторых строках, напротив «Мальчик» / «Девочка», количество крестиков разная. Двенадцать других колонок, названных числовым значением, означают кодовые числа, которые пользователь должен определить в 1 части Японской таблицы.

Выбрав колонку с кодовым числом, найдите строку с римской цифрой, обозначающей месяц зачатия ребенка. Найдя необходимую строку, сравните количество крестиков в колонках «Мальчик»/«Девочка». Обратите внимание на то, напротив какого пола в соответствующей строке находится ячейка с большим количеством крестиков. Ребенка именно этого пола и следует ждать родителям.

Если разница в количестве крестиков незначительная или в обеих ячейках одинакова, то шансы родить мальчика или девочку тоже одинаковые.

Например. Кодовое число, определенное в первой части таблицы, – 11. Поэтому в вертикальной колонке под номером 11 находим месяц зачатия ребенка. Если зачатие произошло в августе, то по вертикали нужно найти римское число VIII. Теперь переместитесь в центр таблицы. В колонке «Мальчик» крестиков 3, а в колонке «Девочка» – 1. Это означает, что семье стоит ждать рождения мальчика.

Достоверность японской таблицы тоже научно необоснованная, как и любого другого подобного метода определения пола ребенка. Однако принято считать, что она помогает планировать пол малыша до зачатия.

В чем разница Китайской и Японской таблиц

К отличиям следует отнести то, что Китайская таблица состоит из собственно таблицы, а для использования японского метода планирования или определения пола будущего ребенка нужно использовать две таблицы.

По статистике, больше сторонников собрала именно Японская таблица. В значительной степени на это повлияло то, что она немного сложнее, потому что учитывает не просто возраст матери и дату зачатия ребенка, а месяцы рождения обоих родителей, а также месяц зачатия ребенка.

Почему ученые отрицают результаты китайской и японской таблиц

Сам факт того, что пол ребенка может быть связан с возрастом матери или отца, отрицают и медики, и биологи. Европейские и американские ученые объясняют это тем, что пол ребенка напрямую зависит только от набора хромосом, имеющихся в мужских сперматозоидах. Точнее, от слияния конкретного вида хромосом, которое невозможно предсказать.

У женщин и мужчин нормальный кариотип состоит из 46 хромосом. Но половая пара хромосом у женщины – это «XX», а у мужчины – «XY». Именно «Y» хромосома, которая отсутствует у женщин, играет решающую роль в формировании мужского пола ребенка во время зачатия. Поэтому, если с женской хромосомой «X» сольется мужская хромосома «X», то у семьи родится девочка ( «XX»), а если с женской сольется мужская «Y», то родится мальчик ( «XY»).

Оплодотворение происходит тогда, когда в середине цикла зрелая яйцеклетка попадает из яичника в маточную трубу. Сперматозоиды с парой хромосом «XY» значительно быстрее, чем с «XX», но живут значительно меньше времени. Поэтому больше шансов зачать мальчика именно в день овуляции.

Кроме этого, таблицы не учитывают особенности образов жизни родителей. Ученые, в частности в Японии, давно придерживаются мнения, что образ жизни есть далеко не последним фактором в формировании пола ребенка. Например, они вычислили, что сложнее зачать мальчика тем родителям, которые имеют вредные привычки, в частности курят.

Подводим итоги

То, что таблицы для определения пола ребенка существуют и пользуются бешеной популярностью, – неоспоримый факт. Несмотря на все выдвинутые гипотезы, их происхождения до сих пор остаются неизвестными, а достоверность – неподтвержденной.

Несмотря на то, что ученые и врачи отрицают какую-либо связь возраста матери, отца и времени зачатия с полом малыша, есть женщины, которые полностью доверяют результата таких таблиц, проверив их на себе, своих родных, друзьях и знакомых. Но есть не менее женщин, у которых вычисленные в таблице результаты не сошлись с реальностью, поэтому после первого же обращения к таблице, они поставили на ней крест.

Если учитывать мнение пользователей, то известно, что сколько людей, столько и мнений. У кого-то результаты сходятся с таблицами, у кого различаются, но это не должно помешать другим, испытать обе таблицы самостоятельно, ведь в результате человек все равно получит подарок от жизни – маленького ребенка – мальчика или девочку.

Нельзя отрицать и того, что использование подобных вещей является одним из занятий, за которым можно интересно провести время. А если женщине хочется, то отказывать себе в этом удовольствии не стоит, особенно, если результат оправдает ожидания.

Японская таблица определения пола ребенка

Определить пол ребёнка или, более того, запланировать его ещё до беременности, можно с помощью японской таблицы. О том, как ей пользоваться, и действительно ли она эффективна, мы и поговорим далее.

Конечно, самый точный способ определения пола ребёнка – диагностика УЗИ. Но проводится она только на 25-й неделе беременности. Японская таблица, позволяющая определить пол ребёнка по месяцу зачатия, обеспечивает возможность узнать пол малыша заранее или спланировать ещё до зачатия, кто у вас родится. Пользоваться ей несложно: будущей маме нужно сделать несколько простых расчётов, и тогда она узнает, кто у неё появится – сын или дочь.

Японский метод планирования пола ребёнка по месяцу зачатия

Уже давно доказан тот факт, что пол ребёнка напрямую зависит от группы хромосом, содержащихся в сперматозоидах.

В яйцеклетках всегда содержатся только женские хромосомы, а вот в сперматозоидах наборы хромосом могут отличаться и быть как мужскими, так и женскими.

Когда клетки сливаются, наборы хромосом соединяются. Если соединяются две женские хромосомы, рождается девочка, если женская и мужская хромосомы – мальчик. По утверждению учёных, узнать заранее, как сольются хромосомы – нереально. Но японцы так не считают, именно поэтому принцип действия японского метода для определения пола ребёнка основан на гипотезе о том, что по периоду зачатия, а также месяцам рождения родителей малыша, можно выявить то, как сольются хромосомы. То есть, организм мужчины может в определённое время вырабатывать как мужские, так и женские хромосомы. Исходя из данного утверждения, и был разработан японский метод планирования ребёнка, состоящий из таблицы и графика, определяющего благоприятный период для зачатия малыша.

Японский календарь приобрёл популярность за достаточно короткий промежуток времени, причём не только у самих японцев, но и у жителей других стран.

По мнению многих будущих мам, японский метод планирования и определения пола будущего малыша действительно эффективен.

Как узнать пол ребёнка по японской таблице? На самом деле, пользоваться таблицей и графиком совсем несложно.

Японский метод включает в себя две таблицы. В одной вы определяете кодовое число, а во второй – пол ребёнка по месяцу зачатия. Чтобы определить кодовое число, нужно от месяцев рождения будущих родителей, указанных в шапке и крайнем столбце таблицы, провести две линии. Число будет находиться на пересечении данных линий. Для примера представим, что папа ребёнка родился в апреле, а мама в декабре.

На месте пересечения двух линий находится цифра 4. Теперь нужно перейти ко второй таблице и вспомнить или спланировать месяц зачатия малыша. Кодовое число (4) находится в шапке таблицы. Нам нужно провести вертикальную линию от него к месяцу зачатия (например, июню) и затем посмотреть полученный результат в середине графика. Вероятность появления младенца того или иного пола выявляется по количеству Х. Чем больше Х, тем выше вероятность того, что у вас родится сын или дочь. В нашем примере видно, что наибольшее количество Х располагается в столбце «Девочка».

Конечно, определить пол ребёнка по японской таблице со 100% вероятностью вряд ли возможно, но, согласно статистике и отзывам о данном методе, он эффективен примерно на 75-80%. Причём многим именно японская таблица помогла заранее спланировать беременность и родить малыша того пола, которого они хотели.

Для выявления пола малыша по японскому методу необходимо определить точный месяц, в который произошло зачатие.

Поэтому посчитайте всё правильно, а уже затем вносите данные в таблицу. Надеемся, что наша инструкция поможет вам посчитать всё правильно и максимально точно.

Оцените материал:

спасибо, ваш голос принят

 

Японская таблица определения пола ребенка и другие способы планирования

Человек привык контролировать любую подвластную ему ситуацию. Люди планируют распорядок дня, режим приема пищи, свой досуг, а также рабочее время. Ни для кого не секрет, что точно так же семейные пары хотят запланировать пол будущего ребенка.

Если же женщина уже находится в интересном положении, то она всеми способами стремится узнать, кто же родится. Существуют таблицы определения пола ребенка, китайский, японский календарь расчета, а также методы вычисления по крови. Рассмотрим самые популярные способы предсказания и их применение.

Японская таблица определения пола ребенка

Данный метод предсказания является, пожалуй, одним из самых сложных. Он состоит из двух таблиц, которые необходимо тщательно изучить.

Для начала вам понадобится первая японская таблица определения пола ребенка. В ней вам представлено две графы: вертикальная и горизонтальная. В обеих из них представлены месяцы с января по декабрь. Для получения необходимого символа вам нужно найти ячейку пересечения месяцев рождения обоих супругов.

месяц рождения отца / матери010203040506070809101112
01159159159159
021026102610261026
037113711371137113
044812481248124812
05159159159159
061026102610261026
077113711371137113
084812481248124812
09159159159159
101026102610261026
117113711371137113
124812481248124812
123456

мальчик

девочка

789101112
01хх
0102ххххххх
010203ххх
01020304хх
0102030405ххх
010203040506хх
020304050607ххх
030405060708хххх01
040506070809ххх0102
050607080910ххххххххххх010203
060708091011хх01020304
070809101112хх0102030405
0809101112хх010203040506
09101112хххххх020304050607
101112хххххххххх030405060708
1112хххх040506070809
12хххх050607080910
хх060708091011
хх070809101112
ххх0809101112
хх09101112
ххххххххх101112
хххххх1112
ххх12

Далее, вам понадобится вторая японская таблица определения пола ребенка, которая даст расшифровку полученному символу. Она состоит из месяцев года и символов первой таблицы. Найдите полученный вами символ, после чего посмотрите, когда вероятность зачатия ребенка необходимого пола выше.

Японская таблица определения пола ребенка не дает никакой гарантии точности своих данных, однако многие пары утверждают, что это довольно эффективный и правдивый метод.

Китайский способ определения пола

Есть еще один вариант того, как зачать младенца необходимого пола. В этом случае китайская таблица выглядит намного проще, чем японская таблица для определения пола. Она имеет всего одну часть, в которой есть две графы: возраст женщины на момент зачатия, а также месяц, когда оно состоялось.

Вам необходимо выбрать цифру, соответствующую возрасту будущей матери на момент зачатия. После этого выберите месяц, в котором произошло оплодотворение и найдите ячейку пересечения полученных данных. В этой графе и будет указан пол, который будет у вашего ребенка.

Способ рассчета по генетической предрасположенности

Китайская таблица и японский календарь планирования пола ребенка имеют четко определенные условия для проведения тестирования. В расчете пола вашего будущего ребенка по предрасположенности все зависит от индивидуальной личности.

Как известно, пол будущего младенца по большей части зависит от мужчины. Именно его предрасположенность и берут в расчет при проведении этого вида расчета. Проследите, кто в семье мужчины рождался чаще: мальчики или девочки. Обычно при сильном перевесе необходимо готовиться к появлению ребенка именно выигравшего пола.

Данный метод не исключает рождение ребенка противоположного статистике пола, однако такая вероятность значительно ниже.

Планирование при помощи диеты

Если генетический метод, китайский календарь и японская таблица определения пола ребенка не могу быть изменены, то на данный способ планирования можно с легкостью повлиять.

Для зачатия младенца женского или мужского пола женщине необходимо придерживаться определенной диеты. Такой метод основан на том, что при приеме некоторых продуктов у представительницы прекрасного пола кислая среда влагалища сменяется щелочной. Исследования показали, что в щелочной среде выживаемость сперматозоидов с хромосомой Х значительно выше. В кислой же среде все наоборот, по большому счету выживают У-хромосомы.

Итак, чтобы зачать девочку, необходимо употреблять в пищу следующие продукты:

  • молочные и кисломолочные продукты;
  • морковь, лук, свеклу и другие овощи;
  • орехи разных сортов;
  • зеленые фрукты и съедобные травяные растения.

Для появления на свет мальчика необходимо придерживаться употребления следующих продуктов:

  • мясные продукты;
  • картофель в любом виде;
  • сладкие сорта фруктов и ягод;
  • хлеб и другая выпечка.

Планирование по овуляции

Существует еще один способ, при помощи которого возможно определение пола ребенка. Японская таблица и китайский календарь часто расходятся в своих данных при сравнении с этим методом планирования.

Всем известно из школьного курса, что у мужчины сперматозоиды делятся на два вида: мужские и женские. Клетки с набором Х-хромосом помогают зачать девочку, тогда как У способствуют появлению мальчика.

Ученые выяснили, что эти виды имеют различия не только в определении будущего пола ребенка, но и в скорости и траектории движения. Сперматозоиды, содержащие Х-хромосомы, могут длительное время жить в женском влагалище и матке, дожидаясь своего часа, однако двигаются они значительно медленнее, чем «мальчики».

Сперматозоиды с набором У-хромосом погибают быстрее, однако они и двигаются молниеносно, идя к своей цели.

Таким образом, если вы планируете зачатие младенца мужского пола, необходимо совершать половой контакт в день, максимально близкий к овуляции. И наоборот, если вам необходимо зачать ребенка женского пола, старайтесь иметь контакт за несколько дней до предполагаемого момента выхода яйцеклетки из яичника.

Заключение

Планируйте беременность и проводите определение пола ребенка. Японская таблица, китайский метод расчета или любой другой вариант определения — вы можете выбрать на свое усмотрение.

Помните, что ни один способ не даст вам абсолютной гарантии. Пол будущего младенца с более вероятной точностью вы сможете узнать лишь после двадцатой недели беременности на очередном осмотре узи.

Можно ли выбрать пол будущего ребенка? Что говорит наука

«Девочки умнее и прилежнее» — «зато у мальчика больше шансов стать руководителем»; «девочка более уязвима» — «мальчик может связаться с дурной компанией». Есть десятки причин, по которым будущие родители хотели бы иметь ребенка определенного пола. Некоторым это важно настолько, что они готовы прибегать к специальным техникам, якобы способным «взломать» программу определения пола. Таких техник много, но помогает ли хоть одна из них на деле? 

От селективного аборта до обновления крови

В древности, особенно в бедных семьях, с детьми «нежелательного» пола особенно не церемонились. Новорожденную девочку могли просто не кормить. В XX веке с появлением достоверных способов определения пола во время беременности эту жестокую практику заменила более мягкая (если так можно выразиться) — селективный аборт. Например, в таких странах, как Китай и Индия, такая практика уже вызвала гендерный перекос. Соотношение полов при рождении в среднем составляет от 102 до 106 мальчиков на сотню девочек. Однако в Китае и Индии в 2005 году оно составляло 120 и 113,6 на 100.

Менее суровые методы предполагали, что существует связь между поведением женщины и полом ее ребенка. Например, когда-то популярным было убеждение, что ребенок мужского пола рождается тогда, когда будущая мать ведет себя как мужчина — агрессивно, страстно, грубо. Повышенная сексуальность также считалась признаком того, что родится мальчик. Так, доктор Мэри Меленди писала в своем руководстве для «идеальных домохозяек» в 1904 году: «Если жена находится на высшем уровне сексуального возбуждения в момент соития, родится мальчик». Спустя 60 лет ее коллега Луиза Бранскомб советовала для рождения девочки практиковать «соитие без женского оргазма», а мужчинам избегать «агрессивного проникновения».

В Китае и Японии популярностью пользуется календарный метод. В китайской версии пол ребенка зависит от месяца оплодотворения и возраста матери. Для вычисления используются специальные таблицы. Скажем, если вам 30 лет, то с февраля по октябрь больше всего шансов родить девочку,  а в остальные месяцы — мальчика. В Японии отталкиваются от месяцев рождения родителей. Например, если оба родились в сентябре, то самый благоприятный месяц для попыток зачать девочку — май, а мальчика — декабрь. При этом исследования на материале почти трех миллионов рождений показывают, что такая методика «не более достоверна, чем подбрасывание монеты».

Еще один популярный метод основан на теории обновления крови. Согласно ему, кровь мужчин обновляется в среднем каждые четыре года, а женщин — каждые три. Пол ребенка определяется по тому из родителей, у кого кровь моложе. Сторонники этого метода советуют разделить возраст отца на четыре, а матери — на три. У кого остаток меньше — у того и кровь моложе. Однако медики критикуют этот метод как основанный на произвольных расчетах. В реальности обновление крови происходит не по графику, а зависит от многих факторов — образа жизни, здоровья, уровня стрессов, физической активности и гормонального статуса.

Как выбирает природа?

Перекос в соотношении полов может быть связан не только с распространением селективных абортов. Ученые много лет пытаются выявить факторы, которые склоняют чашу весов в ту или иную сторону. Так, вероятность рождения мальчика снижается с увеличением возраста родителей. Согласно британскому Национальному исследованию развития ребенка, у родителей-подростков вероятность рождения мальчика выше всего (53%), а у родителей старше 40 лет шансов иметь сыновей существенно меньше — 35%. С каждым годом жизни вероятность родить сына-первенца уменьшается на 1%. Причем в большей степени этот эффект наблюдается у матерей.

По одной из версий, это может быть связано с тем, что вынашивание мальчика более энергозатратно. «Многочисленные исследования показывают, что женщины потребляют больше калорий при беременности мальчиками, чем девочками, — объясняет Биргитте Холлегаард, которая занималась этим вопросом в департаменте биологии Копенгагенского университета. — Им просто нужно больше энергии и питания». В этом случае рождение мальчика в раннем возрасте, когда организм еще здоров и силен, более выгодно.

Недавно группа ученых из США и Швеции опубликовала данные изучения около 160 млн записей о рождаемости. Авторы проследили, как соотношение полов было связано с внешними факторами, такими как уровень радиации, химические загрязнения, температура, экстремальные засухи и другие бедствия. Их выводы согласуются с идеей, что больше мальчиков рождается при благоприятных условиях, а больше девочек — в неблагоприятных. При этом они не нашли подтверждений тому, что соотношение зависит от времени года или температуры.

Некоторые исследования свидетельствуют в пользу того, что питание с меньшим числом калорий повышает шансы на рождение девочки. У женщин, потреблявших в среднем 2 413 ккал в день, шансы рождения мальчика были 56%. А у тех, чьей нормой было 2 283 ккал, — 45%. При этом участницы, у которых в рационе был плотный завтрак, почти в два раза чаще рожали мальчиков. В другом исследовании авторы предположили, что уровень глюкозы в крови каким-то образом влияет на отбор: у женщин с диабетом также обнаружился перекос в сторону девочек.

Есть данные и о том, что тяжелые условия жизни во время беременности связаны с повышенными шансами родить девочку. Изучив 27 показателей стресса у беременных, психологи сделали вывод, что при больших нагрузках, недосыпе и недоедании соотношение новорожденных оказывается 9:4 в пользу девочек. В случае только психологического стресса соотношение было другим — 3:2. Правда, в исследовании участвовали всего 187 женщин. На более обширной выборке этот эффект может не подтвердиться.

Метод Шетлза

С появлением современных методов микроскопии возникли более изощренные способы «игры в Бога». Известно, что пол человека при зачатии задается хромосомами, которые несут в себе женская и мужская половые клетки. Яйцеклетка содержит X-хромосому (женскую), а сперматозоид — либо X, либо Y (мужскую). При слиянии двух X на свет рождается девочка, а X+Y дает мальчика. За редкими исключениями комбинация хромосом определяет, к какому полу будет относить себя сам человек.

В конце 1960-х акушер-гинеколог Лэндрам Шетлз изучил более 500 образцов спермы и пришел к выводу, что «женские» и «мужские» клетки можно отличить по внешнему виду. Маленькие и круглоголовые сперматозоиды содержат в себе мужские Y-хромосомы (андроспермии), в то время как большие и овальные — женские X-хромосомы (гимноспермии). Проверив семейную историю мужчин, он нашел подтверждение: в семье у тех, чья сперма содержала больше круглоголовых сперматозоидов, рождалось больше девочек.

Помещая сперматозоиды в различные среды, Шетлз обнаружил, что «женские» клетки жили дольше в кислотной среде, а «мужские» — в щелочной. Среда влагалища обычно кислая, тогда как у матки и ее шейки она щелочная. Но когда женщина близка к овуляции и к той точке менструального цикла, когда яйцеклетки выходят из яичников, pH влагалища становится более щелочным.

Опираясь на свои открытия, Шетлз предложил соотносить время полового акта со временем овуляции. Чтобы произвести на свет девочку, он советовал воздерживаться от половых контактов до овуляции (а до этого, наоборот, заниматься сексом как можно чаще). В день овуляции и после него, по мнению Шетлза, шансы произвести на свет мальчика были выше всего. Он рекомендовал и другие вспомогательные средства, вроде душа и ванночек с уксусом или содой.

Неоднозначные результаты

Шетлз утверждал, что успешность его метода достигает 75% для девочек и 80% для мальчиков. Правда, он не публиковал эти данные в рецензируемых научных журналах, а упоминал о них в своей книге 1970 года, проданной тиражом более 1,5 млн экземпляров. Но его идею интуитивно поддержали многие врачи.

В 1979 году вышло исследование, выводы которого согласовывались с идеями Шетлза. Авторы изучили более трех тысяч рождений в семьях ортодоксальных евреев. В этих парах женщины соблюдали ритуал разлучения после начала месячных и возобновляли сексуальные контакты после овуляции. Доля родившихся мальчиков оказалась выше на 15% у тех, кто занимался сексом через два дня после овуляции. Но другое исследование 1991 года показало, что мальчики как раз рождаются чаще, если были зачаты за три-четыре дня до овуляции.

Были и работы, авторы которых целенаправленно изучали возможности планирования пола. Так, в 1979 году гинеколог Барбара Симкок изучила историю рождений у 73 женщин на протяжении четырех лет. Часть из них специально следила за временем зачатия, а часть — нет. В итоге Симкок не нашла статистически значимой разницы в соотношении полов у тех и других. Такой же вывод сделали и авторы работы 1995 года на материале 192 беременностей.

Удар по методике Шетлза был нанесен с распространением метода компьютерного анализа спермы (CASA), который позволил более детально рассмотреть форму и движения клеток, чем микроскопия. В редакционной статье British Medical Journal метод Шетлза был опровергнут: «На сегодняшний день исследователи не нашли никаких различий в морфологии между X- и Y-сперматозоидами. Нет данных, что Y-сперматозоиды плавают быстрее».

Новые технологии и старые вопросы

Выбор пола ребенка возможен на этапе преимплантационной генетической диагностики эмбриона — но только у тех пар, которые делают ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение). X- и Y-сперматозоиды разделяют с помощью лазера, а затем используют при искусственном оплодотворении яйцеклетки. В зависимости от задуманного пола яйцеклетку оплодотворяют одним из них. Процент успеха составляет до 91% для девочек и до 75% для мальчиков. 

Однако просто так планировать пол ребенка запрещено законом. Эту процедуру клиники делают, только если есть наследственные заболевания, связанные с полом (например, гемофилия). В выборе пола ребенка будет отказано, поскольку это запрещено законодательством Российской Федерации. Согласно федеральному закону №323, «при использовании вспомогательных репродуктивных технологий выбор пола будущего ребенка не допускается».

В 2019 году появилась еще одна методика управления полом. Она основана на том, что у клеток с X-хромосомами есть особые рецепторы, влияющие на подвижность. Просто так увидеть их нельзя, но можно активировать химическим путем. Активация запускает сложные каскады реакций, в результате чего сперматозоиды теряют способность двигаться. Значит, если ввести в сперму определенное вещество и с помощью центрифуги отсеять обездвиженные клетки, можно повысить шансы на рождение мальчиков (и наоборот).

Метод изначально задумывался как помощь для фермеров и ветеринаров, но сами авторы уже высказывают опасения в том, что технология может быть использована для отбора детей «правильного» пола в домашних условиях и без всякого контроля со стороны медицинских специалистов или государства. Некоторые препараты, доступные в аптеках, уже могут выступить таким «разделителем». Но их нецелевое использование потенциально может привести к проблемам со здоровьем или даже бесплодию.

Но даже если технически доступный и безопасный способ определения пола и появится, остается вопрос этический: к чему приведет бесконтрольное использование таких технологий? Строчка из песни «…на десять девчонок по статистике девять ребят» может зазвучать по-новому.

Антон Солдатов

Examination of new parameters for sex determination of mandible using Japanese computer tomography data

Dentomaxillofac Radiol. 2020 Jul 1; 49(5): 201.

, 1 , 1 , 1 , 1 , 1 , 1 , 1 , 2 and 1

Kei Suzuki

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Hiroyuki Nakano

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Kazuya Inoue

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Yoichiro Nakajima

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Sho Mizobuchi

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Michi Omori

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Nahoko Kato-Kogoe

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

Katsuaki Mishima

2 Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Graduate School of Medicine, Yamaguchi University, Minami-Kogushi 1-1-1, Ube city, Yamaguchi, Japan

Takaaki Ueno

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

1 Department of Oral Surgery, Osaka Medical College 2-7 Daigaku-machi, Takatsuki City, Osaka, Japan

2 Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Graduate School of Medicine, Yamaguchi University, Minami-Kogushi 1-1-1, Ube city, Yamaguchi, Japan

Corresponding author.

Поступила в редакцию 19 июля 2019 г .; Пересмотрено 28 ноября 2019 г .; Принято 4 декабря 2019 г.

Copyright © 2020 The Authors. Опубликовано Британским институтом радиологииЭта статья цитировалась другими статьями в PMC.

Abstract

Objective:

В области криминалистики различение скелетов по полу является важным элементом идентификации для идентификации личности. Метод индивидуального различения полов с использованием скелетов включает в себя метод определения с использованием значений измерений и метод наблюдения макроскопической формы.Оба метода имеют преимущества и недостатки. В этом исследовании мы использовали метод гомологичной модели и анализ основных компонентов (PC) для определения гендерных различий по морфологии нижней челюсти.

Методы и материалы:

45 пациентов (23 мужчины и 22 женщины) КТ для удаления зуба с января 2018 г. по март 2019 г. в отделении челюстно-лицевой хирургии Медицинского колледжа Осаки. Средний возраст составил 43,1 ± 14,6 лет. Пациенты с менее чем 14 оставшимися зубами были исключены, поскольку количество оставшихся зубов может повлиять на форму нижней челюсти.Были построены 3D-изображения и нанесены 20 ориентиров на поверхности 3D-моделей. Мы создали шаблонные модели нижней челюсти, состоящие примерно из 8434 полигонов. Шаблонная модель автоматически вписывалась в индивидуально отсканированное облако точек нижней челюсти за счет минимизации функций внешней и внутренней энергии. Как описано выше, нижние челюсти конструировали для каждого образца с использованием программного обеспечения для моделирования гомологичного тела (HBM, Digital Human Technology, Inc.) и mHBM-Rugle (Medic Engineering Corporation).Нижние челюсти анализировали с помощью PCA.

Результаты:

Вклад самого важного ПК составил 27,2%. 12 ПК объяснили более 75% общей дисперсии. То есть он смог выразить 75% и более экспрессии нижней челюсти с 12 ПК. Достоверная разница между самцом и самкой наблюдалась в первых ПК (критерий Уилкоксона, p <0,05). Визуализация результата первой ПК показала, что нижнечелюстная ветвь у самца крупнее, чем у самки, а угол нижней челюсти нависает наружу.

Заключение:

Этот метод представляет собой комбинацию метода определения с использованием значений предыдущих измерений и определения с использованием макроскопического наблюдения и считается инновационным методом.

Ключевые слова: Нижняя челюсть, Гомологическая модель, Определение пола

Введение

В области криминалистики определение пола по скелетам является неотъемлемым элементом идентификации личности. Определение пола человека по его скелету включает метод, использующий конкретные измерения и макроскопическую морфологическую форму наблюдения.Хотя определение пола с помощью простых измерений может выполнить каждый, измерения сложной трехмерной структуры значительно затруднены. Кроме того, даже специалист может столкнуться с трудностями при определении пола с помощью макроскопического морфологического наблюдения. Поэтому необходим новый метод оценки, который может компенсировать недостатки обоих методов. В области судебной медицины было проведено множество исследований по определению пола по морфологии нижних челюстей. Однако точно определить эти морфологические различия для идентификации пола сложно.Кроме того, также сообщалось, что существуют существенные различия между наблюдателями, а также внутри наблюдателей в определении морфологических различий между полами. 1–5

Inoue et al 6 сообщили, что метод гомологичного моделирования позволяет вычислять и визуализировать характерную форму тела. В соответствии с этим методом результат можно количественно оценить и визуализировать, и одновременно можно использовать как метод, использующий значения измерений, так и метод макроскопического морфологического наблюдения.Поэтому мы определили гендерные различия в морфологии нижней челюсти с помощью метода гомологичного моделирования.

Методы и материалы.

Материалы. изучать. Средний возраст пациентов составил 43,1 ± 14,6 года. Из исследования исключались КТ больных с травмами и врожденными или приобретенными заболеваниями, приведшими к деформации челюсти.Кроме того, были исключены КТ пациентов, у которых осталось менее 14 зубов, поскольку количество оставшихся зубов может повлиять на форму нижней челюсти.

Экспериментальные протоколы были одобрены институциональным комитетом по этике Осакского медицинского колледжа, Осака, Япония. От всех пациентов было получено информированное согласие.

Методы

Гомологическое моделирование и анализ основных компонентов (PC) были выполнены в соответствии с рекомендациями, предложенными Inoue et al. 6 (). Далее на основе КТ пациентов были построены 3D-изображения и нанесены 20 ориентиров на поверхности 3D-моделей (, ). Ориентиры, нанесенные на 3D-КТ-изображения нижних челюстей, были обработаны с помощью программного обеспечения для измерения изображений HBM-Rugle (Medic Engineering, Киото, Япония) в стереолитографическом формате. Мы создали шаблонные модели нижней челюсти, состоящие примерно из 8434 полигонов, используя Geomagic studio 9 (Geomagic Inc.). Шаблонная модель автоматически соответствовала индивидуально отсканированному облаку точек нижней челюсти за счет минимизации функций внешней и внутренней энергии.Функция внешней энергии была основана на евклидовом расстоянии между точками данных на шаблонной модели и точками в базе данных пациента. В основе функции внутренней энергии лежала локальная деформация шаблонной модели. Вершины шаблонной модели считались анатомическими ориентирами с нанесенными ориентирами, а вершины, сгенерированные из поверхности подразделения, соответствовали измеренному облаку точек с минимальной деформацией исходной шаблонной модели. Как описано выше, нижние челюсти были сконструированы для каждого образца с использованием программного обеспечения для моделирования гомологичного тела (HBM, Digital Human Technology, Inc.) и HBM-Rugle.

Метод гомологичного моделирования. Гомологическая модель пациента была создана таким образом, чтобы данные шаблона соответствовали данным КТ пациента.

Анатомические ориентиры. Ориентиры (n=20), нанесенные на поверхности 3D-моделей.

Таблица 1.

Таблица 1.

160 160 16155
НОМЕР
НОМЕР НОМЕР Point Numbermark Anatomical Landmark
1 ПРАВИЛЬНАЯ КОНДИЛАР ГЛАВА 11 Правый нижний угол
2 Leven Condylar Head 12 Lef Onebular 9 9 3 3 60 14 Мандибулярный самолет между левой нижней резокцией и собаками
5 5 5 15 между правым нижним центральным и боковым Riceisor
6 Left Coronoid Process 16 между левым нижним центром боковой резец
7 между правым нижним первым и вторым премолярным 17 Центр Mentalis
8 между левой нижней первой и второй премолярный 18 умственные шины
9 между правым Resisor и Canine 19 между NO18 и NO20
10 между левым нижним резцом и собаками 20 между правой и левой нижней центральной носильной средой

Мэндиблы в исследовании были проанализированы с использованием анализ ПК.Параметры ПК были установлены равными 20. Весь описательный анализ данных и статистический анализ были выполнены с помощью JMP ® v. 5.1.2 (SAS Institute Inc, Кэри, Северная Каролина, США).

Результаты

Вклад самого важного ПК составил 27,2%. 12 ПК воспроизвели более 75% общей дисперсии (). Это означает, что 75% или более нижней челюсти можно воспроизвести с помощью 12 ПК. Достоверная разница между самцами и самками наблюдалась в первом ПК (критерий Уилкоксона, p < 0.05) ().

Таблица 2.

Результаты анализа главного компонента

9
Главный компонент (ПК) EIGEN Value Уровень взносов (%) Кумулятивный уровень вклада (%)
1 3937 27.2 27.2 27.2
2 1439.9 1439.9 11.4 38.6
3 1135 9.0 47.6
4 4 836.9 6.7 54.2
5 4,7 58.9
6 444.3 3.5 62,4
7 395.4 3.1 65.59
8 35016 9 350.3 2,8 68.3
9 316,5 25 70.8

Таблица 3.

Значительная разница между мужчинами и женщинами

Главный компонент (ПК) мужчин самки
PC 1 34.7 ± 52,4 -36.2 ± 40.4 P < 0,05
ПК 2 −3,6 ± 36,2 3,7 ± 40,2 нс
ПК 3 3,8 ± 38,6 −4,0 ± 28,0 н.с.
ПК 4 −2,4 ± 32,1 2,5 ± 25,8 н.с.
ПК 5 1,4 ± 23,9 −1,4 ± 25,1 н.с.
ПК 6 −2,2 ± 21,4 2,3 ± 21,0 н.с.
ПК 7 0,2 ± 23,0 -0,2 ± 16,5 н.с.
ПК 8 0,5 ± 15,9 -0,5 ± 21,7 н.с.
ПК 9 −2.2 ± 18,5 2,3 ± 17,2 н.с.

Результаты первого PC-анализа показали, что нижняя челюсть у самцов была больше и угол наклона нижней челюсти был наклонен наружу по сравнению с таковым у самок ().

Фронтальная сторона основного компонента 1 (ПК1). Нижняя челюсть самцов крупнее, чем у самок.

Боковая сторона главного компонента 1 (ПК1). Нижняя челюсть самцов длиннее, чем у самок.

Изображения стандартного отклонения (± S.D.) главного компонента 1 (PC1). Результаты первого анализа главных компонент показали, что нижняя челюсть у самцов больше и угол наклона нижней челюсти наружу по сравнению с таковым у самок.

Обсуждение

Первым шагом в судебно-медицинской идентификации является определение пола, за которым следует оценка возраста и телосложения, поскольку и то, и другое зависит от пола. Нижняя челюсть является самой крупной, прочной и прочной костью лица и важна для определения пола, особенно при отсутствии полного таза и/или черепа.

В некоторых исследованиях использовались метрические характеристики нижних челюстей для разработки окончательных дискриминантных критериев для определения пола. 7–9 Эти исследования были сосредоточены на стандартных измерениях нижней челюсти, таких как нижнечелюстной угол, бикондилярная и бигониальная ширина, высота ветви и высота симфиза. В других исследованиях использовался описательный метод, который наблюдает за изгибом ветви, формой подбородка и гониальным расширением. 2,4,10–12 Хотя оба метода широко используются, метод определения пола с использованием измеренных значений может быть выполнен любым человеком; однако количество функций, которые можно измерить, ограничено.Напротив, описательный метод должен выполняться опытным экспертом. Таким образом, необходимо установление нового метода оценки, не требующего помощи эксперта, особенно для сложных случаев.

Разработана и применена к контурам стопы и тела базовая технология моделирования, основанная на подразделениях целевой поверхности. 13–16 , Гомологическая модель может использоваться для представления формы человеческого тела с точки зрения данных с тем же количеством точек и топологией.Кроме того, эталонная форма тела (модель-шаблон) автоматически деформируется в соответствии с другими формами тела с использованием метода деформации произвольной формы. 15 Метод произвольной деформации используется для плавной деформации формы объектов путем перемещения контрольных точек решетки вокруг объектов.

Inoue et al. 6 впервые применили этот метод на нижней челюсти, и таким образом были подробно изучены особенности мыщелков нижней челюсти у пациентов с латеральным отклонением нижней челюсти.Поэтому мы рассмотрели, можем ли мы использовать эту технику для определения гендерных различий в морфологии нижней челюсти. Идентификацию пола можно было выполнить с помощью ПК-анализа, а результаты визуализировали для контроля соответствия полученных результатов предыдущим исследованиям. Используя этот метод, пол можно было определить путем гомологичного моделирования нижней челюсти и анализа ПК. Например, когда анализ ПК был выполнен на нижней челюсти с неизвестным полом в тех же условиях с использованием этого метода (программного обеспечения), оценка ПК первого ПК, которая была> 0  или <0, указывала на мужчину или женщину соответственно.Этот метод представляет собой комбинацию метода, использующего предыдущие значения измерений, и описательного метода, использующего макроскопическое морфологическое наблюдение, и поэтому считается инновационным методом. Кроме того, поскольку в качестве значения ПК используется собственное значение, этот метод обладает значительной воспроизводимостью и может оказаться очень эффективным методом дискриминации по признаку пола. Ограничением этого метода является то, что он может быть выполнен только с этим программным обеспечением. Также еще необходимо создать базу данных на основе различных нижнечелюстных данных.Поэтому в будущем необходимо создать базу данных с использованием данных о нижней челюсти разного возраста и деформации челюсти, чтобы изучить полезность метода, представленного в этой статье.

Сноски

Финансирование: Эта работа была поддержана JSPS KAKENHI с номером гранта 18H03001.

ССЫЛКИ

1. Hill CA. Техническое примечание: оценка изгиба ветви нижней челюсти как морфологического индикатора пола. Am J Phys Антропол 2000 г.; 111: 573–57. doi: 10.1002/(SICI)1096-8644(200004)111:4<573::AID-AJPA11>3.0.CO;2-I [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]2. Кемкес-Гроттенталер А., Лёбиг Ф., Сток Ф. Изгиб ветви нижней челюсти и гониальный выворот как морфологические индикаторы пола. гомо 2002 г.; 53: 97–111. doi: 10.1078/0018-442X-00039 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Дурич М., Ракоцевич З., Донич Д. Надежность определения пола скелетов в судебно-медицинском контексте на Балканах. Судебно-медицинская экспертиза 2005 г.; 147 (2-3): 159–64. doi: 10.1016/j.forsciint.2004.09.111 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4. Ху К.С., Кох К.С., Хан С.Х., Шин К.Дж., Ким Х.Дж.Определение пола по неметрическим характеристикам нижней челюсти у корейцев. J Судебно-медицинская экспертиза 2006 г.; 51: 1376–1382. doi: 10.1111/j.1556-4029.2006.00270.x [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]5. Эттле А.С., Преториус Э., Стейн М. Геометрический морфометрический анализ использования нижнечелюстного гониального выворота при определении пола. гомо 2009 г.; 60: 29–43. doi: 10.1016/j.jchb.2007.01.003 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6. Иноуэ К., Накано Х., Сумида Т., Ямада Т., Отава Н., Фукуда Н. и др. . Новый метод измерения морфологии ветви нижней челюсти с использованием гомологичного моделирования.Дентомаксиллофак Радиол 2015 г.; 44: 20150062.. doi: 10.1259/dmfr.20150062 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Франклин Д., О’Хиггинс П., Окснард С. Половой диморфизм нижней челюсти коренных жителей Южной Африки: геометрический морфометрический подход. S Afr J Sci 2008 г.; 104: 101–6. [Google Академия]8. Джайлз Э. Определение пола с помощью дискриминантного функционального анализа нижней челюсти. Am J Phys Антропол 1964 год; 22: 129–35. doi: 10.1002/ajpa.1330220212 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. Мартин Э.С.Исследование египетской серии ЧЕЛЮСТНЫХ ЧЕЛЮСТЕЙ с особым упором на математические методы определения пола. Биометрика 1936 год; 28 (1-2): 149–78. doi: 10.1093/biomet/28.1-2.149 [CrossRef] [Google Scholar]10. Басс В. Остеология человека: лабораторно-полевой метод. Спрингфилд: Томас; 1995. [Google Scholar]11. Лот С.Р., Хеннеберг М. Изгиб ветви нижней челюсти: новый морфологический показатель полового диморфизма в скелете человека. Am J Phys Антропол 1996 год; 99: 473–85. doi: 10.1002/(SICI)1096-8644(199603)99:3<473::AID-AJPA8>3.0.CO;2-X [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]12. Balci Y, Yavuz MF, Cağdir S. Прогностическая точность определения пола нижней челюсти по изгибу ветви. гомо 2005 г.; 55: 229–37. doi: 10.1016/j.jchb.2004.07.006 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]13. Мочимару М., Коучи М., Дохи М. Анализ трехмерных форм стопы человека с использованием метода деформации произвольной формы и его применение для сортировки обувных колодок. Эргономика 2000 г.; 43: 1301–1313. doi: 10.1080/001401300421752 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]14. Мочимару М., Коучи М.Статистика трехмерных форм человеческого тела. SAE Digital Human Modeling for Design and Engineering Conference 2002. [Google Scholar] 15. Коучи М, Мочимару М. Межиндивидуальные вариации внутрииндивидуальных паттернов изменения формы. SAE Digital Human Modeling for Design and Engineering Conference 2006 г.; [Google Академия] 16. Коучи М, Мочимару М. Моделирование формы тела после изменения веса для медицинских учреждений В: Даффи В.Г., изд. Достижения в области прикладного цифрового моделирования человека. Индиана: CRC Press; 2010.пп 217–22. [Google Scholar]

Кортизол участвует в температурно-зависимом определении пола у японской камбалы | Эндокринология

У позвоночных пол обычно определяется генотипом. Однако у пойкилотермных позвоночных, включая рептилий, земноводных и рыб, на определение пола большое влияние оказывают факторы окружающей среды, такие как температура. Мало что известно о молекулярных механизмах, лежащих в основе определения пола у этих видов в окружающей среде.Японская камбала ( Paralichthys olivaceus ) — костистая рыба с XX/XY системой определения пола. Тем не менее, XX камбалу можно заставить развиваться преимущественно либо в фенотипических самок, либо в самцов, выращивая при температуре 18 или 27 ° C соответственно в период половой дифференциации. Таким образом, камбала представляет собой прекрасную модель для изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе определения пола в зависимости от температуры. Ранее мы показали, что лечение ингибитором ароматазы, антиэстрогеном и 27 C вызывает маскулинизацию XX камбалы, а также подавление экспрессии мРНК ароматазы яичникового типа ( cyp19a1 ), стероидогенного фермента, ответственного за превращение андрогенов в эстрогены. в гонадах.Кроме того, введение эстрогена полностью ингибирует маскулинизацию при этих обработках, что свидетельствует о подавлении экспрессии мРНК cyp19a1 , а результирующий биосинтез эстрогена может вызвать маскулинизацию камбалы XX, вызванную высокой температурой воды. Здесь мы продемонстрировали, что кортизол вызывает смену пола с женского на мужской путем прямого подавления экспрессии мРНК cyp19a1 посредством вмешательства в цАМФ-опосредованную активацию, и что метирапон (ингибитор синтеза кортизола) ингибирует 27 C-индуцированную маскулинизацию XX камбалы.Кроме того, концентрации кортизола у 27 C-выращенных мальков были значительно выше, чем у 18 C-выращенных рыб во время половой дифференциации. Эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что маскулинизация при высокой температуре воды объясняется повышением концентрации кортизола во время дифференциации пола гонад у камбалы.

У позвоночных пол обычно определяется генотипом. Однако у пойкилотермных позвоночных, включая рептилий, амфибий и рыб, на определение пола большое влияние оказывает внешняя температура (1).Более того, многие исследования костистых рыб показывают, что факторы окружающей среды, такие как pH (2), плотность (3) и социальные факторы (4, 5), также могут изменить соотношение полов. Однако мало что известно о молекулярных механизмах, лежащих в основе определения пола у этих видов в окружающей среде.

Японская камбала ( Paralichthys olivaceus ) — костистая рыба, имеющая систему определения пола XX/XY. Тем не менее, пол камбалы XX может быть изменен на фенотипических самцов путем выращивания личинок при высокой или низкой температуре воды (5, 6, 7).Таким образом, пол у камбалы определяется генотипом плюс влияние температуры (8). Мы успешно индуцировали у рыб XX преимущественное развитие в фенотипических самок или самцов, выращивая их при температуре 18 или 27°C соответственно в период половой дифференциации (9). Таким образом, камбала представляет собой прекрасную модель для изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе определения пола в зависимости от температуры (TSD). Ранее мы продемонстрировали, что фадрозол (ингибитор ароматазы), тамоксифен (антиэстроген) и лечение 27 С вызывают маскулинизацию XX камбалы, а также подавление экспрессии мРНК ароматазы яичникового типа ( cyp19a1 ), стероидогенного фермента. отвечает за превращение андрогенов в эстрогены в половых железах (9, 10, 11).Кроме того, введение эстрогена полностью ингибирует маскулинизацию с помощью этих методов лечения (11). Эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что подавление экспрессии мРНК cyp19a1 и связанный с этим биосинтез эстрогена могут служить триггером для маскулинизации камбалы XX при высоких температурах воды.

Ароматаза цитохрома Р450, продукт гена cyp19 , экспрессируется в различных тканях и играет важную физиологическую роль в регуляции биосинтеза эстрогенов.Недавно сообщалось, что у немлекопитающих позвоночных экспрессия мРНК cyp19 в яичниках намного выше, чем в семенниках в период половой дифференцировки гонад (9, 12, 13, 14). Кроме того, было показано, что ингибитор ароматазы вызывает маскулинизацию у кур (15), рептилий (16, 17, 18), земноводных (19) и костистых рыб (10, 20, 21). Эти данные свидетельствуют о том, что ароматаза может играть ключевую роль в дифференцировке яичников у немлекопитающих позвоночных видов, которые подвергаются TSD.У крыс транскрипция гена cyp19 стимулируется ФСГ посредством повышения уровня вторичного мессенджера цАМФ в гранулезных клетках (22). Интересно, что активность ароматазы, индуцированная ФСГ, ингибируется кортизолом в культивируемых клетках гранулезы (23). У радужной форели кортизол подавляет секрецию 17β-эстрадиола (Е2) и тестостерона в культивируемых фолликулах яичников (24). С другой стороны, ранее мы сообщали, что у японской камбалы аналог цАМФ (8-Br-цАМФ) стимулирует дозозависимую активацию транскрипционной активности в промоторе cyp19a1 , который, как было показано, содержит чувствительный к цАМФ элемент. (CRE)-подобная последовательность (25).Однако до сих пор неясно, участвует ли кортизол в регуляции транскрипции гена cyp19a1 .

Кортизол является основным глюкокортикоидом, вырабатываемым корой надпочечников у позвоночных, и его продукция увеличивается при стрессе. Ось гипоталамус-гипофиз-надпочечники (HPA), которая контролирует уровни циркулирующего кортизола, высоко консервативна у позвоночных (26). У костистых рыб активация оси HPA начинается в гипоталамусе, где секретируется CRH (26). В ответ на КРГ кортикотрофные клетки передней доли гипофиза высвобождают АКТГ в кровоток, где он циркулирует к межпочечным клеткам, рассеянным по всей головке почки (гомологичен надпочечникам у млекопитающих).АКТГ связывается с рецепторами меланокортина 2 на межпочечных клетках и активирует биосинтез и высвобождение кортизола. Кортизол действует на ткани-мишени, связываясь с глюкокортикоидным рецептором (GR), который регулирует транскрипцию генов, связываясь с глюкокортикоид-чувствительным элементом (GRE) в промоторе гена-мишени. Хотя кортизол также индуцирует транскрипционную активность через минералокортикоидные рецепторы, роль комплекса кортизол-минералокортикоидные рецепторы in vivo у костистых рыб остается неясной (27).С другой стороны, ГР японской камбалы (fGR) активирует транскрипционную активность именно в присутствии кортизола, но не в присутствии других стероидов, таких как кортикостерон, тестостерон и Е2, что позволяет предположить, что ГР может быть специфическим рецептором кортизола в виво (28).

Чтобы выяснить молекулярные механизмы, лежащие в основе определения пола в окружающей среде, включая TSD, мы исследовали участие кортизола в TSD у японской камбалы. Здесь мы показываем, что кортизол индуцирует маскулинизацию рыб XX путем подавления экспрессии мРНК cyp19a1 и, как следствие, биосинтеза эстрогена, что аналогично маскулинизации при высокой температуре воды.Более того, концентрации кортизола у молоди, выращенной на 27 С, были значительно выше, чем у рыб, выращенных на 18 С, во время половой дифференциации. Это убедительно свидетельствует о том, что маскулинизация при высокой температуре воды объясняется повышением концентрации кортизола во время дифференциации пола гонад у камбалы.

Материалы и методы

Животные

Все XX выводков японской камбалы ( P. olivaceus ) были получены искусственно путем спаривания самок камбалы с самцами с измененным полом, как описано ранее (9).Личинки содержались при температуре 18–20°С в течение 29 сут после вылупления (dah). Фенотипических самок и самцов, используемых для измерения кортизола, иммуногистохимии и иммунопреципитации хроматина (ИЧП), получали путем выращивания XX выводков при 18 и 27°С соответственно, от 30 до 100 дней, в критический период половой дифференциации у камбалы (9 ).

Измерение кортизола

стероидных гормона экстрагировали диэтиловым эфиром, как описано ранее (9). Уровни кортизола измеряли с использованием набора для иммуноферментного анализа кортизола (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) в соответствии с инструкциями производителя.

Экспериментальные методы лечения

Лечение стероидами проводилось путем предоставления XX выводкам искусственной диеты (Love Larva; Maruha Co., Yamaguchi, Japan), смешанной с 1, 10 или 100 мкг/г корма кортизола (Sigma-Aldrich, St. Louis, МО) или комбинация кортизола (100 мкг/г рациона) и Е2 (1 мкг/г рациона; Sigma-Aldrich) при 18°С от 30 до 100 dah. Эксперимент с высокой температурой воды проводился путем обработки расплода метирапоном (10 или 100 мкг/г рациона; Sigma-Aldrich) или комбинацией метирапона (100 мкг/г рациона) и кортизола (100 мкг/г рациона) при 27°С. С в тот же период.Фенотипический пол определяли в возрасте 10 месяцев (взрослая стадия) путем гистологического наблюдения в соответствии с предыдущими критериями (10).

Методика культивирования органов гонад

Культура гонадных органов проводилась с использованием XX гонад на расстоянии 55 dah. Гонады замещали на нуклеопоровые фильтры (Whatman, Токио, Япония) в 35-мм пластиковые чашки (Falcon, Лос-Анджелес, Калифорния) и затем культивировали в 2 мл базовой питательной среды, содержащей кортизол (10 -6 м) или комбинация кортизола (10 -6 м) и рекомбинантного ФСГ морского леща (рФСГ) или рекомбинантного ЛГ морского леща (рЛГ) (29) при 18°С в течение 2 недель.Основная культуральная среда состояла из среды Лейбовица L-15 (Life Technologies, Inc., Карлсбад, Калифорния) с добавлением 0,5% BSA и 10 мМ HEPES (pH 7,4).

ОТ-ПЦР

ОТ-ПЦР проводили, как описано ранее (25). В ПЦР использовали следующие праймеры: прямой праймер для cyp19a1 [Банк данных ДНК Японии (DDBJ) инвентарный номер AB017182], 5′-ATCGGATCCCTGCCTGTGAC-3′; обратный праймер для cyp19a1 , 5′-TGGCTGATGCTCTGCTGAGG-3′; прямой праймер для Мюллеровского ингибирующего вещества ( мис ) (инвентарный номер DDBJAB166791), 5′-TGACCCGTACCTACGAGCTG-3′; обратный праймер для мис , 5′-TCGTCCACGTTTCTCGCTCTC-3′; прямой праймер для foxl2 (инвентарный номер DDBJ AB303854), 5′-TCATCAGCAAGTTTCCCCTTC-3′; обратный праймер для fox12 , 5′-TCCGTTGCTGGAGGAGACC-3′; прямой праймер для fsh рецептора ( fshr ) (инвентарный номер DDBJ AB303855), 5′-CATCATGTCCTCCATCC-3′; обратный праймер для fshr , 5′-CGAGGAACTGTCAGTTTGG-3′; прямой праймер для фактора элонгации 1 α ( ef1 α) (номер доступа DDBJAB017183), 5′-AGTTCGAGAAAGAAGCTGCC-3′; и обратный праймер для ef1 α, ATCCAGAGCATCCAGCAGTG-3′. Условия ПЦР были следующими: предварительный прогрев при 95°С в течение 10 мин 25 (для ef1 α и mis ), 30 (для foxl2 и cyp19a1 ) или 40 (для fshr ПЦР) циклов. при 94°С в течение 30 сек, 59°С в течение 30 сек, 72°С в течение 1 мин и окончательное удлинение при 72°С в течение 5 мин.

Гибридизация in situ

Культивированные гонады фиксировали в растворе Буэна при 4°С в течение ночи, обезвоживали в этаноле определенной степени, заливали в парафин и делали серийные срезы толщиной 5 мкм. Гибридизацию in situ проводили с использованием меченого дигоксигенином РНК-зонда mis с использованием срезов, как описано ранее (30).

Транзиторный анализ трансфекции

клетки HEK293 культивировали в среде DMEM (Life Technologies, Inc.) с добавлением 10% обработанной углем/декстраном эмбриональной бычьей сыворотки (HyClone, Omaha, NE) при 37°C. Клетки KGN культивировали в среде DMEM/F-12 (Life Technologies, Inc.). , Inc.) с добавлением 10% обработанной углем/декстраном эмбриональной бычьей сыворотки при 37°C.Временный анализ трансфекции проводили, как описано ранее (25). Все трансфекции выполняли в четырех экземплярах, и все экспериментальные результаты проверяли с использованием теста Левена на гомогенность дисперсии. Данные были проанализированы с помощью одностороннего ANOVA с последующим тестом множественных сравнений Даннета.

ЭМСА

Рекомбинантный белок fGR

был синтезирован с использованием PURESYSTEM classic II (Post Genome Institute, Токио, Япония) в соответствии с инструкциями производителя.Экстракты ядер экстрагировали из клеток HEK293, трансфицированных fGR, с использованием набора для экстракции CellLytic NuCLEAR (Sigma-Aldrich). Олигонуклеотидные зонды, меченные дигоксигенином (смысл, 5′-CTCATCATCGAAACGTCAAATACAC-3′), были сконструированы на основе предполагаемого CRE в промоторе cyp19a1 камбалы . Мутированные зонды (смысл, 5′-CTCATCATCGAAgatcCAAATACAC-3′; нуклеотиды в нижнем регистре указывают на мутации) были созданы путем изменения последовательности. Конкуренты добавляли в 25-кратном молярном количестве для меченых зондов и 1 мкл кроличьего поликлонального антитела против GR (P-20; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Санта-Крус, Калифорния) использовали для анализа суперсдвига. EMSA выполняли, как описано ранее (25).

Иммуногистохимия

Молодь камбалы в возрасте 60 dah фиксировали в растворе Буэна при 4°C в течение ночи, обезвоживали в этаноле определенной степени, заливали в парафин и делали серийные срезы толщиной 5 мкм. После депарафинизации и регидратации срезы инкубировали при 4°С в течение ночи с первичными антителами (разведение 1:500), мышиными моноклональными антителами против CYP19A1 (ARK Resource Co., Ltd., Кумамото, Япония), и кроличьи поликлональные анти-GRα (Affinity BioReagents, Rockford, IL). После промывки срезы обрабатывали в течение 1 ч вторичными антителами (разведение 1:200), антимышиными IgG, конъюгированными с Alexa 488 (Molecular Probes, Eugene, OR), и антикроличьими IgG, конъюгированными с Alexa 546 (Molecular Probes), а затем визуализировали с помощью BZ-9000 (Кейенс, Осака, Япония).

Вестерн-блоттинг

Яичник и печень гомогенизировали в PBS, центрифугировали и супернатанты смешивали с буфером для образцов [0.5 м Трис-HCl (рН 6,8), 10% додецилсульфат натрия, 20% глицерин, 1% бромфеноловый синий и 10% 2-меркаптоэтанол]. Концентрацию белка определяли с помощью Quick Start (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Один микрограмм белка разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на поливинилиденфторидную мембрану (Immobilon-P Transfer Membrane; Millipore, Bedford, MA). Мембрану инкубировали в течение 2 ч либо с анти-CYP19A1, либо с анти-GRα в разведении 1:500 в трис-буферном солевом растворе, содержащем 5% обезжиренного молока, и после промывки обрабатывали в течение 1 ч любым антимышиным IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) или антикроличьи IgG, конъюгированные с пероксидазой хрена (GE Healthcare) в разведении 1:5000.Для обнаружения использовали реагенты для обнаружения вестерн-блоттинга Amersham ECL (GE Healthcare).

Чип-анализ

Анализ ChIP проводили с использованием набора EpiQuik Tissue ChIP (Epigentek, Brooklyn, NY) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, гонады в возрасте 60 и 100 дней инкубировали в среде L-15, содержащей 0,05% трипсина (Sigma-Aldrich), в течение 30 мин, дезагрегировали на отдельные клетки и фиксировали 1% формальдегидом в течение 15 мин. После промывки комплекс белок-ДНК обрабатывали ультразвуком и иммунопреципитировали кроличьим поликлональным анти-GRα или анти-CRE-связывающим белком (CREB)-1 (C-21; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) антитело. Захваченный антителами комплекс белок-ДНК использовали для определения обогащения с помощью количественной ПЦР в реальном времени с использованием SYBR Green I Master (Roche Diagnostics GmbH, Мангейм, Германия) на LightCycler 480 (Roche, Diagnostics GmbH). В ПЦР использовали следующие праймеры: прямой праймер для CRE на промоторе cyp19a1 (инвентарный номер DDBJ AB304921), 5′-GTGTTAGTTTGCAGCATTCC-3′; обратный праймер для CRE, 5′-GAACAGGACTTTGTTCCGTG-3′; прямой праймер для отрицательного контроля на промоторе cyp19a1 , 5′-TCCTGCTGCTCGAGGCCA-3′; и обратный праймер для отрицательного контроля, 5′-ACAGTCTAAACTTGTGAAGC-3′.Условия ПЦР были следующими: предварительный прогрев при 95°С в течение 5 мин, 45 циклов ПЦР при 95°С в течение 10 сек, 55°С в течение 10 сек, 72°С в течение 10 сек.

Результаты

Концентрации кортизола у 27 C-выращенных мальков выше, чем у 18 C-выращенных рыб во время половой дифференциации японской камбалы

Для исследования концентрации кортизола у XX молоди японской камбалы, выращенной при 18 или 27°С, как до, так и во время гонадной половой дифференцировки, мы измеряли концентрации во всем их теле, гонадах и головных почках методом иммуноферментного анализа.В 50 дней, когда гонады недифференцированы по половому признаку (9), не было никаких существенных различий в концентрациях кортизола ни во всем теле, ни в головных почках, ни в гонадах между 18 С- и 27 С-выращенными молодыми особями (рис. 1А; также см. Дополнительный рисунок 1, A и B, опубликованный на веб-сайте The Endocrine Society’s Journals Online по адресу http://endo.endojournals.org). На 60-й день, когда начинается дифференцировка гонад (9), концентрации у молоди, выращенной с помощью 27 С, были значительно выше, чем у рыб, выращенных с помощью 18 С (рис.1A и дополнительный рис. 1, A и B). Точно так же на 100 дах (после периода половой дифференциации) наблюдалась значительная разница в концентрации кортизола во всем теле между 18 C- и 27 C-выращенными рыбами (рис. 1A).

Рис. 1.

Концентрации всего тела и маскулинизирующие эффекты кортизола у XX камбалы. A, концентрации кортизола во всем теле молодых особей XX, выращенных при 18°C ​​(90×103 открытых столбца 90×104) или 27°C (90×103 сплошных столбца 90×104) на 50, 60 и 100 дах. Вертикальные столбцы показывают средние значения (±sem) трех повторностей для пяти объединенных в пул рыб. Достоверность различий групп 27 С по сравнению с группами 18 С обозначена *, P <0,05. B, Соотношение полов у рыб ХХ, получавших 1, 10 или 100 мкг/г корма кортизола (Со) или комбинации Со (100 мкг/г рациона) и Е2 (1 мкг/г рациона) при 18°С и ХХ рыбы, обработанные 10 или 100 мкг/г рациона метирапона (Ме) или комбинацией Ме (100 мкг/г рациона) и Со (100 мкг/г рациона) при 27°С от 30 до 100 дней.С, без лечения.

Рис. 1.

Концентрации всего тела и маскулинизирующие эффекты кортизола у XX камбалы. A, концентрации кортизола во всем теле молодых особей XX, выращенных при 18°C ​​(90×103 открытых столбца 90×104) или 27°C (90×103 сплошных столбца 90×104) на 50, 60 и 100 дах. Вертикальные столбцы показывают средние значения (±sem) трех повторностей для пяти объединенных в пул рыб. Достоверность различий групп 27 С по сравнению с группами 18 С обозначена *, P <0.05. B, Соотношение полов у рыб ХХ, получавших 1, 10 или 100 мкг/г корма кортизола (Со) или комбинации Со (100 мкг/г рациона) и Е2 (1 мкг/г рациона) при 18°С. и ХХ рыбы, обработанные 10 или 100 мкг/г рациона метирапона (Ме) или комбинацией Ме (100 мкг/г рациона) и Со (100 мкг/г рациона) при 27°С от 30 до 100 dah. С, без лечения.

Обработка кортизолом вызывает смену пола с самки на самца у японской камбалы

Чтобы выяснить, вызывает ли кортизол маскулинизацию XX камбалы, мы обрабатывали молодь кортизолом или кортизолом + E2 при 18°C ​​от 30 до 100 dah, что является критическим периодом половой дифференциации у камбалы (9).Гистологические наблюдения на взрослой стадии (возраст 10 месяцев) показали, что кортизол индуцирует маскулинизацию XX камбалы дозозависимым образом и что маскулинизации под действием гормона противодействует совместное введение Е2 (рис. 1В). Это аналогичный результат, полученный при обработке водой при высокой температуре (11). Мы не наблюдали овотестиса ни в одном из исследованных образцов.

Чтобы выяснить, вызывает ли повышение концентрации кортизола при высокой температуре воды маскулинизацию XX камбалы, мы обработали молодь метирапоном, ингибитором синтеза кортизола, при 27°С в интервале от 30 до 100 дней.Все необработанные молодые особи ХХ, выращенные при 27°С, превратились в фенотипических самцов (рис. 1Б). Напротив, обработка метирапоном при 27°С частично ингибировала маскулинизацию, вызванную высокой температурой воды, тогда как это ингибирование полностью устранялось обработкой кортизолом (рис. 1В).

Кортизол вызывает маскулинизацию XX половых желез

Культура гонадных органов использовалась для исследования того, вызывает ли кортизол прямую маскулинизацию XX гонад. Когда XX гонады впервые культивировали с гонадотропинами или без них при 18 или 27°С в течение 2 недель, все они экспрессировали специфические для самок маркеры ( cyp19a1 и foxl2 ) (9, 25), но не специфические для самцов маркеры (). мис ) (30) (рис.2А и дополнительный рис. 2). Наоборот, когда XX гонады культивировали с кортизолом (10 -6 м) при 18°C, все они экспрессировали mis , но не cyp19a1 или foxl2 (рис. 2А). Не наблюдалось явных различий в уровнях экспрессии мРНК fshr между контрольными и обработанными кортизолом гонадами. С другой стороны, комбинация кортизола и рФСГ восстанавливала их паттерны экспрессии, тогда как комбинация кортизола и рЛГ почти не восстанавливала их паттерны экспрессии (рис.2А). Более того, гибридизация in situ показала, что мРНК mis сильно экспрессировалась в соматических клетках обработанных кортизолом гонад (рис. 2, C, D и F), но не в контрольных гонадах (рис. 2, B и F). Е).

Рис. 2.

Влияние кортизола и гонадотропинов на культивируемые гонады. А, ОТ-ПЦР-анализ генов, специфичных для самок ( cyp19a1 и foxl2 ), гена, специфичных для самцов ( mis ), и fshr в культивируемых гонадах (по три особи в каждой группе).Гонады XX на 55 dah культивировали в 2 мл базовой культуральной среды, содержащей кортизол (10 -6 м) или комбинацию кортизола (10 -6 м) и рФСГ или рЛГ при 18°С в течение 2 недель. ef-1 α использовали в качестве внутреннего контроля. Контроль, Отрицательный контроль без гормона. B – D, Анализ гибридизации in situ транскрипта mis в культивируемых гонадах с использованием антисмысловых (B и C) или смысловых зондов (D). Масштабная линейка , 100 мкм. E и F, окрашенные гематоксилином/эозином срезы гонад, культивированные с (F) или без (E) кортизола.

Рис. 2.

Влияние кортизола и гонадотропинов на культивируемые гонады. А, ОТ-ПЦР-анализ генов, специфичных для самок ( cyp19a1 и foxl2 ), гена, специфичных для самцов ( mis ), и fshr в культивируемых гонадах (по три особи в каждой группе). Гонады XX на 55 dah культивировали в 2 мл базовой культуральной среды, содержащей кортизол (10 -6 м) или комбинацию кортизола (10 -6 м) и рФСГ или рЛГ при 18°С в течение 2 недель. ef-1 α использовали в качестве внутреннего контроля. Контроль, Отрицательный контроль без гормона. B – D, Анализ гибридизации in situ транскрипта mis в культивируемых гонадах с использованием антисмысловых (B и C) или смысловых зондов (D). Масштабная линейка , 100 мкм. E и F, окрашенные гематоксилином/эозином срезы гонад, культивированные с (F) или без (E) кортизола.

Кортизол напрямую подавляет транскрипцию гена

cyp19a1 через GR in vitro

Чтобы выяснить, подавляет ли кортизол транскрипцию гена cyp19a1 in vitro , был проведен анализ трансфекции люциферазы с использованием клеток HEK293 и KGN.Предыдущее исследование с использованием клеток HEK293 показало, что аналог цАМФ (8-Br-цАМФ) индуцирует активность люциферазы дозозависимым образом в промоторе cyp19a1 , содержащем CRE-подобную последовательность, но не в промоторе, лишенном CRE (25). . Соответственно, настоящий анализ продемонстрировал дозозависимое подавление цАМФ-индуцированной активности люциферазы кортизолом в промоторе cyp19a1 , содержащем CRE, но не в промоторе, лишенном сайта (фиг. 3, A и B). Затем, чтобы проверить, связывается ли комплекс кортизол-GR напрямую с CRE in vitro , был проведен EMSA с использованием белка fGR и ядерных экстрактов, приготовленных из клеток HEK293. In vitro синтезированный fGR образовывал комплекс белок-ДНК с меченым зондом, дизайн которого был основан на CRE, тогда как комплекс исчезал при добавлении избытка немеченого зонда, но не мутантного зонда (рис. 3C). С другой стороны, ядерные экстракты из клеток, экспрессирующих fGR, обработанных кортизолом, образовывали специфические комплексы белок-ДНК, тогда как ядерные экстракты, приготовленные из неэкспрессированных или необработанных клеток, не проявляли комплексообразования (рис. 3D).

Рис.3.

Участие комплекса кортизол-GR с CRE в промоторе cyp19a1 in vitro . A и B, транскрипционная активность промотора cyp19a1 камбалы в клетках HEK293 (A) и KGN (B) в присутствии 8-Br-цАМФ и кортизола. Относительную активность люциферазы (Luc) рассчитывали на основе значения контроля пустой плазмиды (pcDNA). Вертикальные столбцы обозначают среднее значение (± стандартная ошибка среднего) числа повторений. Достоверные отличия от контроля, лишенного 8-Br-цАМФ и кортизола, обозначены **, P <0.01. C и D, подтверждение связывания , синтезированного in vitro , fGR (C) или ядерных белков (D) из клеток, экспрессирующих fGR, с CRE в промоторе cyp19a1 камбалы . Стрелками отмечены конкретные комплексы для ГР.

Рис. 3.

Участие комплекса кортизол-ГР с CRE в промоторе cyp19a1 in vitro . A и B, транскрипционная активность промотора cyp19a1 камбалы в клетках HEK293 (A) и KGN (B) в присутствии 8-Br-цАМФ и кортизола.Относительную активность люциферазы (Luc) рассчитывали на основе значения контроля пустой плазмиды (pcDNA). Вертикальные столбцы обозначают среднее значение (± стандартная ошибка среднего) числа повторений. Достоверные отличия от контролей, лишенных 8-Br-цАМФ и кортизола, обозначены **, P <0,01. C и D, подтверждение связывания in vitro синтезированного fGR (C) или ядерных белков (D) из клеток, экспрессирующих fGR, с CRE в промоторе cyp19a1 камбалы . Стрелками отмечены конкретные комплексы для ГР.

GR связывается с CRE в пределах промотора

cyp19a1 в гонадах молодых особей XX, выращенных при 27°C, но не при 18°C ​​

Используя гонады молодых особей XX, выращенных при 18 и 27°C, был проведен анализ ChIP, чтобы выяснить, связывается ли комплекс кортизол-GR с CRE in vivo . ДНК в иммунопреципитатах с кроличьим поликлональным антителом против GRα или против CREB-1 подвергали количественному ПЦР-анализу с использованием пары специфических праймеров для CRE или отрицательного контроля, в котором амплифицировали участок 2.На 2 т.п.н. выше сайта начала транскрипции cyp19a1 (рис. 4А). Ни GR, ни CREB не были связаны с контрольными фрагментами гонад молодых особей XX, выращенных при 18 или 27 ° C (дополнительная рис. 3). CRE-фрагменты, связывающиеся с ГР, были обогащены в гонадах ювенильных особей ХХ, выращенных при 27°С, но не при 18°С (рис. 4Б). Наоборот, фрагментов, связывающихся с CREB, было значительно больше в гонадах молодых особей ХХ, выращенных при 18°С, чем при 27°С (фиг. 4С).

Рис. 4.

Участие комплекса кортизол-GR с CRE в промоторе cyp19a1 in vivo . А. Локализация специфических пар праймеров в промоторе cyp19a1 . B и C, количественный анализ ChIP занятости GR (B) или CREB (C) в CRE в пределах промотора cyp19a1 в гонадах молодых особей XX, выращенных при 18°C ​​( пустых столбца, ) или 27°C ( сплошных столбца). ) на 60 и 100 дах. ДНК в иммунопреципитатах с анти-GRα или анти-CREB-1 антителом подвергали количественному ПЦР-анализу со специфичной парой праймеров для CRE или негативным контролем, который амплифицировал участок 2.2 т.п.н. выше сайта начала транскрипции (дополнительная рис. 3). Количественное определение фрагментов ДНК выражается относительно входных данных. Вертикальные столбцы обозначают среднее значение (±sem) для четырех повторов для пяти объединенных гонад. Значимость различий групп 27 С по сравнению с группами 18 С обозначена *, P <0,05 и **, P <0,01. D – F, флуоресцентный иммуногистологический анализ белков GR (D) и CYP19A1 (E) в гонаде (обведено пунктирной линией ) выращенной молоди 18 C (60 dah) камбалы.F, Их объединенный образ. Масштабная линейка , 200 мкм. G, вестерн-блоттинг белков CYP19A1 и GR в яичниках и печени взрослой камбалы.

Рис. 4.

Участие комплекса кортизол-ГР с CRE в промоторе cyp19a1 in vivo . А. Локализация специфических пар праймеров в промоторе cyp19a1 . B и C, количественный анализ ChIP занятости GR (B) или CREB (C) в CRE в пределах промотора cyp19a1 в гонадах молодых особей XX, выращенных при 18°C ​​( пустых столбца, ) или 27°C ( сплошных столбца). ) на 60 и 100 дах.ДНК в иммунопреципитатах с анти-GRα или анти-CREB-1 антителом подвергали количественному ПЦР-анализу со специфичной парой праймеров для CRE или отрицательного контроля, который амплифицировал область на 2,2 т.п.н. выше сайта начала транскрипции (дополнительная фиг. 3). Количественное определение фрагментов ДНК выражается относительно входных данных. Вертикальные столбцы обозначают среднее значение (±sem) для четырех повторов для пяти объединенных гонад. Значимость различий групп 27 С по сравнению с группами 18 С обозначена *, P < 0.05 и **, P < 0,01. D – F, флуоресцентный иммуногистологический анализ белков GR (D) и CYP19A1 (E) в гонаде (обведено пунктирной линией ) выращенной молоди 18 C (60 dah) камбалы. F, Их объединенный образ. Масштабная линейка , 200 мкм. G, вестерн-блоттинг белков CYP19A1 и GR в яичниках и печени взрослой камбалы.

Колокализация CYP19A1 и ГР в соматических клетках ХХ половых желез

Иммуногистохимию проводили с мышиными моноклональными антителами против CYP19A1 и кроличьими поликлональными антителами против GRα с использованием XX камбал (60 dah) для изучения локализации белков CYP19A1 и GR в гонадах.Важно отметить, что белки CYP19A1 и GR экспрессировались в соматических клетках XX гонад (рис. 4, D-F). Для дальнейшего изучения белков, распознаваемых антителами против CYP19A1 и против GRα, в тканях камбалы использовали вестерн-блот-анализ. При использовании анти-CYP19A1 одна полоса, отображающая белок CYP19A1 (59 кДа), была обнаружена в яичнике, но не в печени, тогда как анти-GRα выявила белок GR в виде одиночной полосы (90 кДа) как в яичнике, так и в печени. (рис. 4G).

Обсуждение

В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что кортизол вызывает смену пола с самки на самца, а метирапон (ингибитор синтеза кортизола) ингибирует индуцируемую 27 С маскулинизацию XX камбалы.Более того, концентрация кортизола у 27 С-выращенной молоди была значительно выше, чем у 18-С-выращенных рыб в период половой дифференциации у камбалы. Поэтому мы предполагаем, что маскулинизация при высокой температуре воды связана с повышением концентрации кортизола во время дифференциации пола гонад у камбалы.

Кортизол регулирует широкий спектр систем, включая аспекты метаболизма глюкозы, ионорегуляцию, поведение и иммунные функции.Уровни в плазме могут быть повышены стрессорами, такими как обращение, кислая вода и быстрые изменения температуры (26). Метирапон является ингибитором синтеза кортизола и блокирует повышение уровня кортизола в плазме у костистых рыб (31, 32, 33). У радужной форели лечение метирапоном эффективно блокирует повышение уровня кортизола в плазме после тренировки, и блокада связана с быстрым снижением активности гликогенфосфорилазы α и быстрым увеличением активности гликогенсинтазы (33). Кроме того, сообщалось о влиянии кортизола на репродуктивную функцию многих видов рыб (26).Более того, гормон не только подавляет рост яичников, но и сдвигает соотношение полов у форели в сторону самцов (34). Таким образом, гормон оказывает ингибирующее действие на развитие яичников. Кортизол также участвует в контроле метаморфоза (35, 36). Предыдущее исследование японской камбалы показало, что концентрация кортизола во всем организме значительно увеличивалась в возрасте 15 дней, достигала пиковых уровней в 32 дня (метаморфическая кульминация) и быстро снижалась в возрасте 42 дней (37), что указывает на важную роль кортизола в метаморфозе камбала.В настоящем исследовании не было замечено различий в концентрации кортизола во всем теле у рыб, выращенных при 18 и 27°C в 50 дней (до половой дифференциации). Однако на 60-й день (время начала половой дифференциации) концентрации заметно снижались у 18 С-выращенной молоди, но не у 27 С-выращенных рыб. Таким образом, представляется вероятным, что высокая температура воды поддерживает повышенную концентрацию кортизола у молоди камбалы в период половой дифференциации.

Ранее мы показали, что маскулинизация камбалы XX при обработке 27 С вызывает подавление экспрессии мРНК cyp19a1 в гонадах и что обработка эстрогеном при этой температуре восстанавливает фенотип.Это указывает на то, что маскулинизация при высокой температуре воды может быть связана с подавлением экспрессии мРНК cyp19a1 и, как следствие, снижением уровня эстрогена (9, 10, 11). Чтобы исследовать, может ли кортизол вызывать маскулинизацию гонад XX, а также подавление экспрессии мРНК cyp19a1 , мы провели эксперименты с культурой гонадных органов с использованием гонад XX на 55 dah. Когда ХХ гонады культивировали в течение 2 недель при 18 или 27°С, в гонадах обнаруживали экспрессию cyp19a1 и foxl2 (маркеры, специфичные для самок), но не mis (маркер, специфичный для самцов).Когда XX гонады культивировали с кортизолом при 18°С, все они экспрессировали специфический для мужчин маркер, но не специфические для самок маркеры. Напротив, комбинация кортизола и рФСГ восстанавливала их паттерны экспрессии, тогда как комбинация кортизола и рЛГ — нет. Эти результаты позволяют предположить, что кортизол непосредственно индуцирует маскулинизацию XX половых желез и что маскулинизирующий эффект гормона конкурирует с ФСГ.

ФСГ является одним из гонадотропинов, секретируемых гипофизом позвоночных.Он стимулирует транскрипцию генов cyp19 за счет повышения уровня вторичного мессенджера цАМФ в клетках гранулезы крыс (22). Хотя ранее мы сообщали, что аналог цАМФ (8-Br-цАМФ) проявляет дозозависимую индукцию активности cyp19a1 -люциферазы в промоторе cyp19a1 , содержащем CRE-подобную последовательность (25), неизвестно, является ли кортизол активным. участвует в регуляции транскрипции гена cyp19a1 . Мы провели анализ трансфекции люциферазы с использованием HEK293 ( cyp19 -неэкспрессирующие клетки) и клеток KGN ( cyp19 -экспрессирующие клетки), чтобы исследовать влияние кортизола на транскрипцию гена cyp19a1 .В обеих клетках кортизол подавлял активность cyp19a1 -люциферазы через fGR, когда промотор содержал нативный CRE, но не при использовании мутантного CRE. EMSA показало, что in vitro синтезировали fGR или ядерные белки из fGR-экспрессированных клеток, обработанных кортизолом, могут специфически связываться с CRE in vitro . Следовательно, кортизол подавляет транскрипцию гена cyp19a1 , возможно, путем связывания с CRE in vitro . Для дальнейшего изучения того, связывается ли комплекс кортизол-GR с CRE in vivo , мы провели анализ ChIP с использованием гонад молоди XX, выращенных при 18 и 27°C.Этот анализ показал, что GR прямо или косвенно связывается с CRE в пределах промотора cyp19a1 в гонадах 27 C-выращенных мальков, но не у 18 C-выращенных рыб, и поэтому, вероятно, ответственен за специфическое для самцов ингибирование Транскрипция гена cyp19a1 .

GRE состоит из двух полусайтов (38). Недавно сравнительный анализ 160 сайтов связывания GR из 77 генов, регулируемых глюкокортикоидами позвоночных, показал, что целых 40% сайтов связывания GR содержат только гексануклеотид, сходный с половиной сайта GRE (39).С другой стороны, фрагмента ДНК длиной 18 п.н., содержащего CRE в промоторе CRH, достаточно, чтобы обеспечить как положительную регуляцию цАМФ, так и глюкокортикоидную репрессию цАМФ-стимулирующей экспрессии, предполагая, что глюкокортикоидная репрессия также происходит посредством вмешательства в опосредованную цАМФ активацию. (40). Хотя CRE, обнаруженный в этом исследовании, не похож на полуучасток GRE, может иметь место ингибирующая функция комплекса кортизол-GR посредством вмешательства в активацию, опосредованную цАМФ.

Многие виды рептилий, земноводных и рыб проявляют TSD. Однако мало что известно о влиянии глюкокортикоидов и гонадотропинов на ТСД в этих группах. Интересно, что White и Thomas (41) сообщили, что у черепахи ( Trachemys scripta ), рептилии с TSD, комплексы надпочечников, почек и половых желез (AKG) у предполагаемых самцов секретировали больше прогестерона и кортикостерона, чем у предполагаемых самок. Кроме того, уровень АКТГ в плазме, который активирует биосинтез и высвобождение глюкокортикоидов, был значительно выше у мужчин, чем у женщин.Кроме того, секреция эстрадиола AKG обоих полов сильно стимулировалась ФСГ, в то время как секреция прогестерона и кортикостерона AKG обоих полов индуцировалась АКТГ, что свидетельствует о том, что в температурно-чувствительный период AKG реагируют как на ФСГ, так и на АКТГ (41). В этом исследовании камбалы с TSD концентрации кортизола у молоди XX, выращенной при температуре производства самцов, были значительно выше, чем при температуре производства самок во время половой дифференциации.Более того, экспрессия мРНК cyp19a1 была подавлена ​​в гонадах XX, культивируемых с кортизолом, тогда как экспрессия восстанавливалась в гонадах, культивируемых как с кортизолом, так и с рФСГ, что предположительно связано со стимуляцией ФСГ продукции эстрогена в период половой дифференциации. Таким образом, хотя маскулинизирующий эффект глюкокортикоидов у других видов с TSD остается неясным, можно с уверенностью заключить, что эти гормоны участвуют в TSD.

У млекопитающих изучалось влияние глюкокортикоидов на стероидогенез гранулезных клеток яичников (23).Кортизол и дексаметазон (синтетический глюкокортикоид) ингибируют выработку эстрогена, индуцированную ФСГ, в культивируемых гранулезных клетках крысы, тогда как они стимулируют выработку прогестерона в этих клетках. Следовательно, ингибирующее действие глюкокортикоидов не представляет собой общее подавление функции гранулезных клеток. Более того, ГР существуют в гранулезных клетках крысы, что позволяет предположить, что глюкокортикоиды также оказывают прямое ингибирующее действие на выработку эстрогена яичниками у млекопитающих. Следовательно, глюкокортикоиды могут подавлять стимулирующую ФСГ функцию продукции эстрогенов у всех позвоночных, хотя необходимы дальнейшие исследования.

В заключение, это исследование представило первые доказательства участия кортизола в TSD. Кортизол индуцировал маскулинизацию рыб XX путем прямого подавления экспрессии мРНК cyp19a1 посредством вмешательства в цАМФ-опосредованную активацию. Эти результаты дают новое представление о молекулярных механизмах, лежащих в основе определения пола в окружающей среде, включая TSD.

Благодарности

Благодарим сотрудников Исследовательского центра рыболовства префектуры Кумамото за выращивание рыбы; Др.Осаму Томинага (Университет префектуры Фукуи, Эйхэйдзи, Япония), д-р Масатомо Тагава (Университет Киото, Киото, Япония), д-р Казуфуми Такамунэ, д-р Хисато Сайто и д-р Син-ити Абэ (Университет Кумамото) за полезные советы; и д-р Тошихико Янасэ (Университет Фукуока, Фукуока, Япония) за предоставление клеток KGN.

Сокращения:

  • AKG,

    Надпочечно-почечно-гонадный комплекс;

  •  
  • ЧИП,

    иммунопреципитация хроматина;

  • CRE, 5

    CRE,

  • 5

    CREB,

    5

    DAH,

    5

    DDBJ,

    E2,

    03 EF1 α,

  • FGR,

  • 5

    фшр ,

  • ГР,

  • ГРЭ,

    глюкокортикоид-чувствительный элемент;

  •  
  • HPA,

    гипоталамус-гипофиз-надпочечники;

  •  
  • mi ,

    Вещество, ингибирующее Мюллер ;

  • рФСГ,

    рекомбинантный ФСГ морского леща;

  •  
  • rLH,

  •  
  • TSD,

    определение пола в зависимости от температуры.

Каталожные номера

1

Baroiller

JF

,

Guiguen

Y

,

Fostier

A

1999

1999

Конечные аспекты половой дифференциации рыб и

.

Cell Mol Life SCI

55

:

910

910

9103 2

2

RUBIN

RUBIN

da

1985

1985

Эффект pH на соотношении секса в цихлидах и Poeciliid (Teleostei).

COOPEIA

1

:

233

233

235

3

Фрэнсис

RC

RC

RC

1984

1984

Эффекты двунаправленного отбора для социального доминирования на агонистическое поведение и соотношения секса в райской рыбе ( Macropodus Opercularis ).

.

PROC NATL Acqu Sci USA

90

:

10673

10673

10675

10675

10675

10675

5

K

1995 к

1995

Снижение женской пропорции в нижней растущей рыбе отделена от нормальных и феминизированных саженцев Hirame Paralichtys оливковый .

Рыбные SCI

61

:

199

201

6

201

6

Yamamoto

E

E

1999

1999

1999

1999

Исследования по вопросам секса-манипуляции и производства клонированных популяций в Hirame, Paralichtys Olivaceus (Temminck et Schlegel ).

аквакультура

170003

173

:

235

240

70002

Kitano

T

,

Takamune

K

,

Nagahama

Y

,

ABE

S

2001

Роль ароматазы Р450 в половой дифференциации гонад японской камбалы ( Paralichthys olivaceus ).

окружающей среды SCI

8

:

1

11

8

11

8

OSPINA-ALVAREZ

N

,

Piferrer

F

2008

, зависящее от температуры Определение пола в Рыбе Пересматривало: распространенность характер реакции на соотношение мужчин и женщин и возможные последствия изменения климата

.

plos One

3

:

E2837

:

E2837

Kitano

T

,

Takamune

K

,

Kobayashi

T

,

Nagahama

Y

,

ABE

S

1999

Подавление экспрессии гена ароматазы P450 у самцов с измененным полом, вызванное выращиванием генетически женских личинок при высокой температуре воды в период половой дифференциации у японской камбалы ( Paralichthys olivaceus ).

J Mol Endxrinol

23

:

16000

176

10

Kitano

T

,

Takamune

K

,

Nagahama

Y

,

ABE

S

2000

Ингибитор ароматазы

и 17α-метилтестостерон вызывают изменение пола от генетических самок к фенотипическим самцам и подавление экспрессии гена ароматазы P450 у японской камбалы ( Paralichthys olivaceus ).

Mol Refored dev

56

:

1

5

11

Kitano

T

,

yoshinaga

N

,

Shiraishi

E

,

Koyanagi

T

,

abe

S

2007

Тамоксифен индуцирует маскулинизацию генетических самок и регулирует экспрессию мРНК ароматазы P450 и мюллеровского ингибирующего вещества у японской камбалы ( Paralichthys olivaceus ).

Mol RefRod dev

74

:

1171

1177

12

1177

12

Йошида

K

,

Shimada

K

,

Shimada

K

,

Saito

N

1996

Выражение P45017α-гидроксилазы и Гены ароматазы Р450 в гонадах кур до и после половой дифференцировки.

GEN COM Endcreinol

102

:

233

240

13

Smith

CA

,

Andrews

JE

,

SINCLAIR

AH

1997

Гонадальная дифференциация секса в куриных эмбрионах : экспрессия генов рецептора эстрогена и ароматазы.

j Стероид биохим моль биол

60

:

295

302

Jeyasuria

Jeyasuria

jeyasuria

P

,

Place

AR

1997

Экспрессия ароматазы в развитие Diamondback Terrapin ( Malaclemys terrapin ) эмбрионы.

j Стероид биохим моль биол

61

:

415

325

15 0002

325

15

Elbrecht

A

,

SMITH

RG

1992

1992

Ароматаза и определение полов в цыплят.

Наука

255

:

467

470

16 000 0002

Dorizzi

,

Richard-Mercier

N

,

DOVVAGES

G

,

PIEEA

CC

1994

Маскулинизация гонад ингибиторами ароматазы у черепахи с определением пола в зависимости от температуры.

дифференцировка

58

:

1

8

17 20002

RHEN

T

,

Lang

T

JW

JW

1994

1994

Определение полов в привязке. стероидная среда.

GEN COMC ENDCRINOL

96

:

243

254

180003 —

254

18 20002

Wibbels

T

,

экипажа

T

,

1994

1994

Предполагаемый ингибитор ароматазы индуцирует мужское определение полов в женской моничной ящерии и у черепахи с определением пола в зависимости от температуры.

J Эндокринол

j endxrinoloL

141

:

295

299

1

1

d

,

d

,

dournon

,

dournon

c

1999 C

1999

Обводом секса на основе ингибитора ароматазы в Newt Pleurodeles Waltl .

J Exp Zool

283

:

43

50

20

Piferrer

F

,

Zanuy

S

,

Carrillo

M

,

Solar

II

,

devlin

RH

,

Дональдсон

EM

1994

Кратковременная обработка ингибитором ароматазы во время половой дифференциации приводит к тому, что хромосомные самки лосося развиваются как нормальные, функциональные самцы.

J EXP Zool

270

:

255

262

21

Guiguen

Y

,

Baroiller

JF

,

Ricordel

MJ

,

ISEKI

K

,

Mcmeel

OM

,

Martin

SAM

,

A

A

A

1999

Участие эстрогенов в процессе дифференциации секса в двух видах рыб: радужная форель ( OnCorhynchus mykiss ) и тилапия ( Oreochromis niloticus ).

Mol Revod dev

54

:

154

162

22

22

FITZPATRICK

SL

,

Richards

JS

1994

Определение циклического аденозина 3 ‘, 5’-монофосфат- элемент ответа в промоторе ароматазы крысы, который необходим для активации транскрипции в гранулезных клетках крысы и клетках Лейдига R2C.

Моль Эндокринол

8

:

1309

1309

1309

1319

23

1319

23

23

aj

,

Erickson

GF

1978

1978

Глюкокортикоид ингибированию производства эстрогена, вызванного FST в культивированных клетках гранулоза.

стероиды

32

:

639

639

648

240002

240002

,

JF

,

SUMPTER

JP

1990

Эффект Cortisol на секрецию сексных стероидов от культурных яичников фолликулов радужная форель.

Gen Comp EndCrinol

77

:

403

407

25

Yamaguchi

T

,

Yamaguchi

S

,

Hirai

T

,

Kitano

T

2007

Передача сигналов фолликулостимулирующего гормона и Foxl2 участвуют в регуляции транскрипции гена ароматазы во время дифференциации пола гонад у японской камбалы, Paralichthys olivaseus .

Biochem BioPhys Res Compason

359

:

935

940

26

Wendelaar Bonga

SE

SE

1997

Стресс ответ на рыбу.

физиол Rev

77

:

591

625

27

Greenwood

AK

,

Butler

PC

,

белый

RB

,

Demarco

U

,

PEARSE

D

,

Fernald

RD

2003

Множественные рецепторы кортикостероидов у костистых рыб: различные последовательности, паттерны экспрессии и транскрипционная активность.

Эндокринология

1440003:

4226

4226

4236

4236

28

Tokuda

Y

,

Touhata

K

,

Kinoshita

M

,

Toyohara

H

,

Sakaguchi

M

,

Yokoyama

,

yokoyama

y

,

IChikawa

T

,

yamashita

S

S

1999

Последовательность и экспрессия кДНК, кодирующая японский глюкокортикоидный рецептор.

Рыба SCI

65

:

466

471

29 0002

K

,

Soyano

K

K

,

okuzawa

K

,

Kagawa

H

2008

Продукция биологически активных гонадотропинов красного морского леща в бакуловирусной системе.

Cybium

32

:

218

219

30

Yoshinaga

N

,

Shiraishi

E

,

Yamamoto

T

,

Iguchi

T

,

ABE

S

,

Kitano

T

2004

Сексуально диморфная экспрессия костистого гомолога мюллерова ингибирующего вещества во время дифференциации пола гонад у японской камбалы, Paralichthys olivaceus .

Biochem BioPhys RES COMMANT

322

:

508

513

31

LICH

LICH

GJ

,

Taylor

MH

1980

Роль кортизола в метаболических изменениях, вызванных стрессом в Глазной гетероклитус .

GEN COMP EndCrinol

42

:

219

227

32

227

32

Kagawa

N

,

Mugiya

N

,

Mugiya

Y

2002

2002

Мозга HSP70 MRNA выражение связана с уровнями кортизола плазмы в золотой рыбке ( Carassius auratus ), подвергшийся воздействию потенциального хищника.

Zool SCI

19

:

735

740

33

740

33

940

33

Milligan

Milligan

CL

2003

2003

2003

Регуляторная роль для кортизола в мышечном метаболизме гликогена в радужной форели OnCorhynchus Mykiss Walbaum.

J Exh Biol

206

:

3167

3167

3173

34

3173

34

Van Den

Hurk

R

,

Van Oordt

PGWJ

PGWJ

1985

Эффекты натуральных андрогенов и кортикостероидов на дифференциацию гонад радужная форель, Salmo gairdneri .

GEN COMP EndCrinol

57

:

216

222

35

222

35

Jaffe

RC

RC

rc

1981

1981

Плазменная концентрация кортикостерона во время Rana Catesbeiana Tadpole Metamorphose.

Gen Comp EndCrinol

44

:

314

318

36

Krug

EC

,

,

KV

,

Battista

J

,

NICOLL

CS

1983

Кортикостероиды в сыворотке Rana catesbeiana в процессе развития и метаморфоза.

Gen Comp EndCrinol

52

:

232

241

37

DE

Isus

E

Isus

EU

,

Hirano

T

,

INUI

Y

1991

Изменения в Cortisol и щитовидной железы концентрации гормонов в период раннего развития и метаморфоза у японской камбалы Paralichthys olivaceus .

Gen Comp EndCrinol

82

:

369

376

38

Payvar

F

,

de Franco

D

,

Firestone

GL

,

EDGAR

B

,

o

,

o

,

ookret

S

,

Gustafsson

,

JA

,

JA

,

yamamoto

KR

1983

1983

, специфичное последовательность, специфическое связывание глюкокортикоидами.

ячейки

35

:

381

392

392

392

39

39

Merkulov

VM

,

Merkulova

,

Merkulova

Ti

2009

Структура Глюкокортикоидных объектов связывания рецептора и разных версий положительных глюкокортикоида. : анализ базы данных GR-TRRD.

J стероид биохим моль биол

115

:

1

8

40

80003 40

Guardiola-diaz

HM

,

Kolinske

JS

,

,

LH

,

Seakholtz

AF

1996

Отрицательная глюкокортикоидная регуляция циклического аденозина 3′,5′-монофосфат-стимулируемая экспрессия рецептора кортикотропин-рилизинг-гормона в клетках AtT-20.

Моль Эндокринол

10

:

317

317

329

41

41

,

RB

,

ThomaS

P

1992 P

1992

1992

Стимуляция in vitro Стероидогенез гипофизами в черепахе ( Traachemys scripta ) в температурно-чувствительный период для определения пола.

Биол Репрод

47

:

952

959

Copyright © 2010 эндокринного общества

Участие андрогена и его рецептора в определении пола земноводных

Аннотация

Введение

В японской лягушке Рана ( R .) rugosa ген рецептора андрогенов ( AR ) на W-хромосоме ( W AR ) практически не выражен. Ранее мы показали, что у Z-AR трансгенных самок лягушек произошла неполная смена пола от самки к самцу. Однако на сегодняшний день нет сообщений, показывающих, что AR с андрогенами может определять генетически запрограммированную судьбу мужского пола у любых видов позвоночных. Здесь мы исследовали, функционируют ли AR вместе с андрогенами как детерминант пола у видов амфибий.

Методы

Проверить, происходит ли полная смена пола от женского к мужскому в R . rugosa лягушки, мы произвели AR -трансгенные (Tg) и -нокдаунные (KD) самки R . rugosa лягушек с помощью генной ловушки, опосредованной мегануклеазой I-SceI , и системы CRISPR/Cas9 соответственно. Головастиков AR -Tg и -KD выращивали в воде, содержащей тестостерон (Т) в концентрации от 0 до 7,1 нг/мл. Замороженные срезы были приготовлены из гонад метаморфизованных лягушек и иммуноокрашены на ламинин, Vasa, Pat1a, CYP17 и AR.Мы также использовали ПЦР-анализ для изучения экспрессии Dmrt1 , Pat1a и CYP17 в гонадах самок лягушек KD и плацебо-KD.

Результаты

Полная смена пола самки на самца произошла у самок лягушек AR -Tg ZW, когда головастикам в воду для выращивания вводили низкую дозу Т. Однако у самок лягушек AR -KD ZW не наблюдалось смены пола, когда гонады обрабатывались дозами T, достаточно высокими, чтобы вызвать полную смену пола с самки на самца даже у лягушек дикого типа.

Обсуждение

Эти результаты позволяют предположить, что AR с его андрогенным лигандом функционирует как детерминант мужского пола в ZW типа R . морщинистые лягушки.

Образец цитирования: Ойке А., Кодама М., Ясумасу С., Ямамото Т., Накамура Ю., Ито Э. и др. (2017) Участие андрогена и его рецептора в определении пола земноводных. ПЛОС ОДИН 12(6): е0178067. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178067

Редактор: Balasubramanian Senthilkumaran, University of Hyderabad, INDIA

Поступила в редакцию: 3 февраля 2017 г.; Принято: 8 мая 2017 г .; Опубликовано: 5 июня 2017 г.

Авторское право: © 2017 Oike et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантами MN от Министерства образования, науки и культуры Японии (№ 15K07137) и грантом Университета Васэда на 2016 финансовый год для специальных исследовательских проектов категории А (№.А-16) до МН.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

У большинства видов позвоночных пол определяется генетически. Как и у других позвоночных, гетерогаметные половые хромосомы у земноводных определяют судьбу самца (XX/XY) или самки (ZZ/ZW) [1]. Большой интерес в этом плане представляют японцы R . Лягушка rugosa обладает двумя системами определения пола (типа XX/XY и ZZ/ZW) в пределах одного вида [2].Лягушки популяций Востока, Запада и Центральной Японии гетерогаметны самцы, а лягушки севера — гетерогаметны самки [3]. Кроме того, лягушки в северной и центральной зонах имеют гетероморфный тип половых хромосом, а в восточной и западной — гомоморфный [3]. Однако на сегодняшний день у этого вида не обнаружено гена, определяющего пол.

Андрогены оказывают различные эффекты на мужские репродуктивные органы, скелетные мышцы головного мозга и другие ткани-мишени. Андрогенные эффекты опосредованы тканеспецифическим контролем транскрипции генов-мишеней через ядерный рецептор андрогенов (AR) [4].У мышей с нокаутом AR самцы имеют женский вид и массу тела, но смены пола с самки на самца не происходит [5, 6]. Следовательно, AR , по-видимому, не участвует в детерминации пола у мышей, хотя Sry на Y-хромосоме идентифицирован как детерминант пола у самцов этого вида [7].

В R . rugosa frog Ген AR расположен на половых (X, Y, W и Z) хромосомах, как сообщается, на инвертированной области Y и W хромосом [8].Известно, что структурные перестройки, такие как инверсии, транслокации и делеции, вызывают деградацию нативных генов за счет накопления вредных мутаций [9, 10]. Таким образом, вполне вероятно, что ген AR подвергается процессу эволюционной деградации из-за отсутствия рекомбинации между инвертированными и неинвертированными областями половых хромосом (X vs. Y и Z vs. W). Известно, что ген AR на W-хромосоме ( W AR ) практически не экспрессируется в R . rugosa эмбрионов, возможно, из-за вариаций взаимодействия промоторного элемента и родственного фактора транскрипции между генами W- и Z-AR [10]. Однако когда W AR трансгенно экспрессируется в клетках Xenopus A6, белки W-AR могут транс-активировать андрогензависимую транскрипцию в репортерных анализах [10], что указывает на то, что деградация W-AR является неполной в клетках Xenopus A6. Р . морщинистая . Интересно, что активация экспрессии AR наблюдается в гонадах самцов R . rugosa головастиков до определения пола [10]. Кроме того, мужские гонады R . rugosa синтезируют больше андрогенов, чем самки [11]. Принимая во внимание эти результаты, мы предположили, что AR может участвовать в определении пола самца у этого вида. Для решения этой проблемы мы произвели Z AR -трансгенных (Tg) самок (ZW) лягушек. У подмножества этих лягушек развился гибрид семенников и яичников, называемый овотестис. Другими словами, у лягушек Tg ZW произошла неполная смена пола от самки к самцу.Известно, что белок AR содержит N-концевой трансактивационный домен (NTD), центральный ДНК-связывающий домен (DBD) и С-концевой лиганд-связывающий домен (LBD), который связывает андрогены, такие как тестостерон (Т) и дигидротестостерон [12]. Таким образом, мы предположили, что неполная смена пола может происходить из-за ограниченного уровня андрогенов в гонадах лягушек ZW. Изучить возможность того, что AR вместе с андрогенами может определять генетически запрограммированный мужской пол в R . rugosa , мы изготовили крестовины AR -нокдаун (KD) ZW, а также крестовины Tg ZW.Используя систему CRISPR/Cas9 [13], мы успешно мутировали ген AR , лишенный NTD, DBD и LBD, путем сдвига рамки считывания. Здесь мы впервые сообщаем, что AR вместе с андрогенами может быть детерминантой мужского пола у позвоночных.

Материалы и методы

Заявление об этике

Все эксперименты на животных в этом исследовании проводились с официального разрешения Комитета по экспериментам на животных Университета Васэда (номер разрешения: 2016-A076), как подробно описано ранее [3].

Животные и определение длины гонад

Для всех экспериментов ZZ/ZW типа R . Использовали rugosa . Неоплодотворенные яйцеклетки подвергали искусственной овуляции и осеменению [13]. Оплодотворенные икринки превращались в головастиков через неделю после стадии (St.) 25 и переносились в воду, содержащую различные концентрации тестостерона (Т) (ASKA Pharmaceutical Co., Ltd., Токио, Япония) для индукции полового акта от самки к самцу. разворот. Лягушек через неделю после метаморфоза умерщвляли для хирургического удаления половых желез для гистологического и ПЦР-анализа.Эмбрионы и головастики стадировали согласно Shumway [14] и Taylor и Kollros [15]. Генетический пол каждого головастика определяли на молекулярном уровне, как сообщалось ранее [16]. Делали фотографические изображения внешнего вида гонад и измеряли длину каждой гонады.

Получение тотальной РНК и синтез кДНК

Суммарная РНК была получена из гонад лягушек, а затем синтезирована кДНК для использования в ПЦР-анализе, как сообщалось ранее [16].

Конструкция

AR -вектор экспрессии

Мы сконструировали векторы для трансгенеза, как подробно описано в другом месте [3].

Производство лягушек Tg

Мы получили лягушек Tg ZW, используя генную ловушку, опосредованную мегануклеазой I-SceI [3]. В оплодотворенные яйца вводили мегануклеазу I-Sce I (NEB, Токио, Япония) и расщепленную плазмиду I-Sce I, кодирующую Z-AR и V5 (GKPIPNPLLGLDST), с использованием инъекционного аппарата NANOJECT II (Drummond, Broomall). , Пенсильвания, США). Мы также получили плацебо-Tg (pTg) лягушек ZW в качестве контроля путем инъекции I-Sce I-расщепленных векторов pDPCG и мегануклеазы в эмбрионы ZW.Эмбрионы Tg и pTg и головастики выращивали, как описано ранее [3]. Чтобы подтвердить интеграцию Z-AR в геномную ДНК, мы экстрагировали ДНК из кончика хвоста всех головастиков Tg в St. V, используя набор AllPrep DNA/RNA Micro Kit (QIAGEN, Токио, Япония) [10]. Используемые праймеры для ПЦР: прямой 5’-GCGGTTTTTCCAACTTACCA-3’ и обратный 5’-CGAGACCGAGGAGAGGGTTA-3’.

Экспрессия трансгена в гонадах Tg

Мы использовали анализ ПЦР для изучения экспрессии Z-AR/V5 в гонадах Tg ZW.Тотальную РНК получали из гонад лягушек дикого типа (Wt) и Tg сразу после метаморфоза с использованием ISOGEN (NIPPON GENE, Токио, Япония) и синтезировали кДНК [16]. Реакция ПЦР включала 4 мин при 94°C, затем 35 ( Z-AR / V5 , Dmrt1 и CYP17 ) 95°C (30 сек), 62°C (30 сек) , и 72°C (1 мин), заканчивая 7-минутным удлинением при 72°C. Фрагменты ДНК кДНК Z-AR / V5 (260 п.н.), CYP17 (330 п.н., AB284119) и Dmrt1 (374 п.н., AB272609) амплифицировали методом ПЦР с использованием набора праймеров для каждого соответствующий шаблон.Последовательности праймеров приведены в таблице 1.

AR генный мутагенез кДНК

Cas9 в векторе pCS2+ была получена от Thermo Fisher Scientific Inc. (Иокогама, Япония). Конструкцию ДНК линеаризовали с помощью Not I и транскрибировали с помощью набора mMessage mMachine SP6 (Thermo Fisher Scientific Inc.) с получением кэпированной мРНК Cas9 , которую затем очищали с помощью набора RNeasy Mini Kit в соответствии с протоколом очистки РНК (QIAGEN). ). Чтобы создать сконструированный экспрессионный вектор с одной направляющей РНК (гРНК), мы поместили промотор T7, за которым следовали два сайта Bsa I, выше недавно описанного каркаса гРНК [13].ГРНК была разработана для нацеливания на последовательности протоспейсеров в интересующем гене AR в форме 5’-CC-(N)20-GGG-3’. GGG представлял собой мотив, примыкающий к протоспейсеру (PAM). Полученную конструкцию расщепляли Dra I и транскрибировали с использованием набора mMessage mMachine T7 (Thermo Fisher Scientific Inc.). гРНК очищали с использованием набора RNeasy Mini Kit (QIAGEN). Мы получили лягушек KD ZW, используя систему CRISPR/Cas9, с помощью которой мы успешно разрушили NTD, DBD и LBD гена AR путем сдвига рамки.

Анализ КД половых желез

Мы инъецировали мРНК Cas9 в дозе 500 мкг на эмбрион вместе с гРНК (300 мкг/эмбрион), нацеленной на AR , в 2202 одноклеточную стадию R . морщинистых эмбриона. Буфер MMR (модифицированный Рингером от Marc) (4,6 нл, рН 7,8) и гРНК (300 мкг/эмбрион) также инъецировали 1071 эмбриону в качестве контроля. Мы обозначили эмбрионы с нокдауном AR плацебо как эмбрионы «pKD». После того, как эмбрионы KD и pKD подвергали геномной ПЦР для амплификации области-мишени, продукты ПЦР встраивали в вектор pTAC-2 с использованием набора для клонирования TA PCR (BioDynamics Lab.Inc., Токио, Япония) и секвенированы.

Иммуногистохимия

Иммуногистохимию проводили, как описано ранее [17]. Первичные антитела против Vasa, Pat1a, CYP17 и AR были приготовлены в нашей лаборатории [3, 18], а антитело против ламинина было приобретено у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). Замороженные срезы семенников Wt ZZ и яичников Wt ZW, а также гонад Tg, pTg, KD и pKD ZW окрашивали антителами ламинина в разведении 1:300, Vasa в разведении 1:1000, Pat1a в разведении 1:1000, CYP17 в разведении 1. :2000 и AR 1:2000.За этим последовали вторичные козьи антитела IgG Alexa Fluor 488 к кроличьим антителам (для ламинина, Vasa и Pat1a) и козьи антитела к мышиным IgG Alexa Fluor 555 (для CYP17 и AR) (Life Technologies, Токио, Япония) или не- иммунная сыворотка. Положительные сигналы регистрировали под флуоресцентным микроскопом (Nikon, модель ECLIPSE E600, Токио, Япония).

Экспрессия генов в гонадах КД

ПЦР-анализ проводили для изучения экспрессии генов в гонадах KD и pKD R . rugosa лягушки после метаморфоза. Реакционная смесь содержала 4 мкл мастер-микса, 4 мкл концентрации 2,5 мкМ каждого прямого и обратного праймера (таблица 1), 1 мкл каждой кДНК-матрицы и 11 мкл воды в конечном объеме 20 мкл. кДНК CYP17 , Dmrt1 и Pat1a (LC013336) использовали в качестве матрицы. кДНК GA3PDH (AB284116) использовали для стандартизации уровней ввода мРНК каждого гена. Продукты ПЦР электрофорезировали в 4,5% полиакриламидных гелях и окрашивали бромистым этидием [16].Интенсивность полос определяли с помощью компьютерной программы (Image J ver. 1.49q, сделанной Rasband W, NIH, USA (http://imagej.nih.gov/ij/download.html). Относительные уровни экспрессии каждого гена рассчитывали по следующая формула: относительный уровень экспрессии = ген X (обработанный T) x GA3PDH (обработанный T) / ген X (необработанный T) x GA3PDH (обработанный T) [16].

Статистика

Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. Различия (P<0,05), определенные с помощью однофакторного ANOVA, считались статистически значимыми.

Получение и анализ изображений

Изображения были отсканированы и скорректированы по яркости и контрастности с помощью Adobe Photoshop CS2.

Результаты

Анализ Tg половых желез

Гистология.

Яичники ZW дикого типа (Wt) были намного больше, чем семенники Wt ZZ (длина 4,7±0,5 и 0,8±0,1 мм соответственно; рис. 1). Когда яичники трансгенных лягушек pTg ZW обрабатывали T в концентрации 0,02 нг/мл в воде для выращивания на стадии головастика, их размер не уменьшался значительно по сравнению с яичниками Wt ZW (4.3±0,5 против 4,7±0,5 мм, рис. 1). Ранее было показано, что смена пола от самки к самцу не индуцируется при обработке яичника T в концентрации 0,02 нг/мл в воде для выращивания R . rugosa головастиков [16]. Однако в настоящем исследовании средние размеры гонад Tg ZW при 0,02 нг/мл T стали значительно меньше, чем размеры гонад pTg ZW (рис. 1, 1,6 ± 0,9 против 4,3 ± 0,5 мм, P <0,01).

Рис. 1. Изменение длины гонад Tg.

Количество гонад разных лягушек указано в скобках в верхней части панели.Каждая полоса представляет собой среднее значение ± SE для длины гонад в каждой группе лягушек. ZW, самка и ZZ, самец.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178067.g001

Экспрессия трансгена
Z-AR/V5 .

Мы исследовали экспрессию трансгена Z AR/V5 с помощью ПЦР-анализа у лягушек ZW массой 10 мкг. мРНК Z-AR / V5 транскрибировалась исключительно во всех гонадах Tg ZW, но результат репрезентативного образца показан на третьей панели рис. 2.

Рис. 2. Экспрессия мРНК Z-AR/V5 , CYP17 и Dmrt1 .

Анализ ОТ-ПЦР использовали для обнаружения мРНК Z-AR/V5 , CYP17 и Dmrt1 в гонадах Wt ZZ и Wt ZW, а также Tg ZW и pTg ZW, обработанных Т в концентрации 0,02 нг/мл в вода для выращивания. Верхняя панель, Dmrt1 выражение; 2-я панель, экспрессия CYP17 ; 3-я панель, Z-AR / V5 выражение; нижняя панель, генетический пол каждой лягушки.ZZ, самец и ZW, самка.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178067.g002

Экспрессия генов Dmrt1 и CYP17 , необходимых для маскулинизации гонад в R . rugosa [16]. мРНК Dmrt1 и CYP17 экспрессировались на высоких уровнях в гонаде Wt ZZ (семенники), но не в гонаде Wt ZW (яичнике) (рис. 2, первая и вторая панели, соответственно). При 0,02 нг/мл T (+T) эти два гена транскрибировались в гонадах Tg ZW на значительно более высоких уровнях, чем в гонадах pTg ZW (фиг. 2).

Иммуногистология.

Мы подготовили замороженные срезы гонад Wt и Tg лягушек и окрасили на Vasa, Pat1a, CYP17 и AR. Vasa является белком, специфичным к зародышевым клеткам как мужских, так и женских половых желез, но Pat1a специфичен только к незрелым ооцитам яичника [18]. CYP17 является стероидогенным ферментом, ответственным за превращение прогестерона в андростендион [19]. Размер яичника ZW оказался намного больше, чем размер яичка (рис. 3а и 3б). Гонада Tg ZW превратилась в яичко при лечении 0.02 нг/мл Т (+Т) (рис. 3с). Однако гонады pTg ZW превратились в яичники при обработке 0,02 нг/мл T (+T) (рис. 3d).

Рис. 3. Иммуногистология гонад Tg.

Замороженные срезы (7 мкм) гонад Tg и pTg ZW, обработанных (+) и без (-) T в концентрации 0,02 нг/мл в воде для выращивания, и гонад Wt ZZ, Wt ZW, Tg ZW и pTg ZW подготовлены и окрашены на Vasa, Pat1a, CYP17 и AR. ExA, внешний вид. ZZ, самец и ZW, самка.

https://дои.org/10.1371/journal.pone.0178067.g003

Сильные иммуноположительные сигналы для Vasa наблюдались во всех исследованных гонадах: семенники Wt (рис. 3e), яичники Wt (рис. 3f), а также Tg (рис. 3g) и pTg (фиг. 3h) ZW гонады, обработанные 0,02 нг/мл T (+T). Положительные сигналы для Pat1a продуцировались только в яичниках Wt ZW (рис. 3j) и pTg ZW (рис. 3l), а не в семенниках Wt ZZ (рис. 3i) или Tg ZW, обработанных Т (семенники) (рис. 3k). С другой стороны, положительные сигналы CYP17 и AR продуцировались в семенниках Wt (рис. 3m и 3q) и гонадах Tg ZW (+T) (семенники) (рис. 3o и 3s), но не обнаруживались в яичниках диких животных (рис. 3n и 3s). 3r) и pTg ZW гонады (+T) (яичник) (рис. 3p и 3t).Эти результаты ясно показывают, что гонады Tg ZW трансформируются в семенники, когда Т подается в воду для выращивания головастиков, но Т не может маскулинизировать яичник в семенник без интеграции и экспрессии экзогенного Z-AR в геномной ДНК Р . морщинистых самок.

Анализ КД половых желез

Генный мутагенез.

Мы получили лягушек KD ZW, используя систему CRISPR/Cas9, с помощью которой мы успешно разрушили NTD, DBD и LBD гена AR путем сдвига рамки.Когда мы вводили мРНК Cas9 вместе с гРНК, нацеленной на AR , 2202 эмбрионам, а буфер MMR (модифицированный Рингер Марка) или только гРНК вводили 1071 эмбриону в качестве контроля, 511 и 419 эмбрионов развились в головастиков при St. 25-1W. , соответственно. Затем мы исследовали мутагенез у лягушек 44 KD и 38 pKD с нормальным внешним видом через 1 неделю после метаморфоза. Скорость мутагенеза у лягушек KD (ZW) составляла от 50 до 100%, тогда как у лягушек pKD (ZW) геномная мутация отсутствовала. Мутированные последовательности из одного репрезентативного образца KD (ZW), инъецированного мРНК Cas9 и гРНК, показаны на рис. 4B.Скорость мутагенеза составила 75% (6 из 8 секвенированных клонов).

Рис. 4. Мутагенез гена AR .

(A) Три домена гена AR . Секвенирование ДНК, кодирующее 3 функциональных домена белка андрогена (NTD, DBD и LBD), показано закрытыми прямоугольниками. Цифры указывают положения нуклеотидов доменов в R . Ген rugosa AR (AB372103, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/315013360). гРНК указывает сайт для мутагенеза в положениях нуклеотидов со 114 по 160 кДНК Z-AR .(B) Профиль мутаций одного эмбриона, секвенированного после клонирования. Wt: Нуклеотидная последовательность с позиций 114-160 кДНК Z AR . Последовательность PAM (синяя) показана вместе с последовательностью-мишенью. Мутации: Мутированные последовательности нацеливания на кодирующую область AR . Красная буква A указывает на несовпадение вставки A в обмен на T.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178067.g004

Гистология.

Яичники Wt ZW были намного больше, чем семенники Wt ZZ (4.7±0,4 против 0,8±0,1 мм; Рис 5). Когда яичники Wt ZW обрабатывали T в воде (от 0 до 7,1 нг/мл), размер яичников постепенно уменьшался дозозависимым образом. Средний размер гонад Wt ZW, обработанных Т в дозе 0,02 нг/мл, был сходен со средним размером яичников Wt (4,7±0,5 против 4,3±0,5 мм). Гонады KD ZW, обработанные 2,0 нг/мл Т, были аналогичны гонадам Wt ZW, обработанным Т в дозе 0,2 нг/мл (2,8±0,3 против 2,7±0,9 мм; P>0,85). При 2,0 нг/мл T все гонады pKD ZW были значительно меньше, чем гонады KD ZW (1.2±0,4 против 2,8±0,3 мм; Р<0,01). При 7,1 нг/мл все гонады Wt ZW были сходны по размеру с семенниками ZZ (рис. 5).

Рис. 5. Изменение длины гонад в КД.

Количество гонад разных лягушек указано в скобках вверху каждой панели. Каждая полоса представляет собой среднее значение ± SE для длины гонад в каждой группе лягушек. Среднее значение (±SE) отличалось от соответствующих групп (P<0,01), но незначительно от другой группы (P>0,85). ZZ, самец и ZW, самка.

https://дои.org/10.1371/journal.pone.0178067.g005

Иммуногистология.

Мы подготовили замороженные срезы гонад Wt, Tg, pTg, KD и pKD и подвергли иммуноокрашиванию на ламинин, Vasa, Pat1a, CYP17 и AR. Ламинин является компонентом базальной мембраны мужских и женских половых желез [18]. Яичник Wt ZW был намного больше, чем семенник Wt ZZ (рис. 6a и 6b). Гонада KD ZW также была больше, чем гонады pKD ZW (рис. 6c и 6d). Положительные сигналы для ламинина были получены в базальной мембране, окружающей семенные канальцы в яичках (рис. 6e) и ооцитах в яичниках Wt и KD ZW (рис. 6f и 6g).Это окрашивание ламинином очерчивало структуру семенных канальцев гонад pKD ZW, обработанных 2,0 нг/мл T (+T) (фиг. 6h). Мы также наблюдали сильные иммуноположительные сигналы для Vasa в зародышевых клетках как мужских, так и женских гонад (рис. 6i и 6j), а также в гонадах KD ZW и pKD ZW (рис. 6k и 6l). Положительные сигналы Pat1a были обнаружены в ооцитах яичников Wt ZW (фиг. 6n) и гонад KD ZW, обработанных 2,0 нг/мл T (+T) (фиг. 6o). Однако сигналы Pat1a не продуцировались семенниками Wt (рис. 6m) или гонадами pKD ZW, обработанными 2.0 нг/мл Т (+Т) (рис. 6р).

Рис. 6. Иммуногистология гонад AR -KD.

Мы подготовили замороженные срезы (7 мкм) из гонад Wt ZZ и ZW без обработки T, а также гонад KD и pKD ZW, обработанных (+) и без (-) T в концентрации 2,0 нг/мл в воде для выращивания, и окрасили их для ламинина, Vasa, Pat1a, CYP17 и AR. ExA, внешний вид. ZZ, самец и ZW, самка.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178067.g006

Положительные сигналы CYP17 и AR были обнаружены в яичках ZZ (рис. 6q и 6u соответственно) и в гонаде pKD ZW, обработанной 2.0 нг/мл T (+T) (рис. 6t и 6x). Напротив, положительные сигналы для CYP17 и AR не продуцировались в гонаде KD ZW, обработанной Т (рис. 6s и 6w), и в яичнике дикого типа (рис. 6r и 6v). Эти результаты показывают, что Т может трансформировать яичник Wt в семенник, но эта трансформация блокируется, если AR нокдаун у самок R . морщинистые лягушки.

Экспрессия генов в женских половых железах KD.

Мы выращивали самок головастиков в воде с Т от 0 до 2.0 нг/мл и исследовали экспрессию Dmrt1 , CYP17 и Pat1a в гонадах Wt и KD. Dmrt1 (транскрипционный фактор 1, связанный с двойным полом и mab-3) участвует в формировании семенников в R . морщинистая [20]. Экспрессия Dmrt1 была на очень низком уровне в яичнике Wt ZW и гонаде ZW, обработанных 0,02 нг/мл T (яичник), но увеличилась в гонаде pKD ZW, обработанной T в дозе 2,0 нг/мл (семенник) (P <0,01, фиг.7А). Он также был на низком уровне в гонаде KD ZW, обработанной T at 2.0 нг/мл (яичник) (фиг. 7А). Это также относится к экспрессии CYP17 . Экспрессия мРНК CYP17 была высокой в ​​семенниках Wt ZZ (фиг. 7B). Его экспрессия значительно увеличивалась в гонаде pKD ZW (яичках) по сравнению с гонадой KD ZW (яичнике), когда обе обрабатывали Т в дозе 2,0 нг/мл (P<0,01, фиг. 7B). При 0 и 0,02 нг/мл T уровни экспрессии CYP17 были низкими в гонадах ZW (фиг. 7B).

Рис. 7. Экспрессия генов в гонадах KD.

Относительные уровни экспрессии Dmrt1 (A), CYP17 (B) и Pat1a (C) рассчитывали по формуле, приведенной в разделе «Материалы и методы».Номера исследованных половых желез указаны в скобках вверху каждой панели. Каждая полоса представляет собой среднее нормализованное выражение (±SE) гонад каждой группы. Среднее значение (±SE) отличается от соответствующих групп (P<0,01). ZW, самка и ZZ, самец.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0178067.g007

Наконец, экспрессию Pat1a исследовали в гонадах Wt ZW и KD ZW. Экспрессия была низкой в ​​гонадах Wt ZW (фиг. 7C). Экспрессия Pat1a значительно увеличилась в гонадах KD, обработанных Т в 2.0 нг/мл (яичники) по сравнению с pKD, обработанной T в количестве 2,0 нг/мл (семенники) (P<0,01, фиг. 7C). Ранее было показано, что в R . rugosa лягушки Pat1a специфически экспрессируется в незрелых ооцитах яичника [18], и что полная смена пола от самки к самцу происходит при обработке яичника Wt ZW T в концентрации 2,0 нг/мл у головастика. стадия [16]. Таким образом, мы можем заключить, что когда AR нокдаун у лягушек ZW, яичник будет устойчив к трансформации в семенник даже при дозах T, достаточно высоких, чтобы вызвать полную смену пола с самки на самца у Wt R. . морщинистых самок.

Обсуждение

Гены, определяющие пол, были идентифицированы у нескольких видов позвоночных: SRY у человека [21], Dmy [22] и Sox3 [23] у рыб медака. Каждый из этих генов расположен на Y-хромосоме и кодирует фактор транскрипции, который регулирует экспрессию гена-мишени, чтобы направить индифферентную гонаду к судьбе яичка. Кроме того, обнаружены Dmrt1 у курицы на Z [24] и DM-W у Xenopus на W-хромосоме [25].Ранее мы показали, что W AR почти не выражается в R . rugosa эмбриона по сравнению с Z-AR [10]. Затем мы предположили, что Z AR начал играть роль, возможно, решающую, учитывая его сигнальную функцию половых гормонов, в определении мужского пола в ZZ/ZW R . морщинистая . Чтобы уточнить это, мы исследовали, является ли Z-AR критическим геном для определения мужского пола у ZZ/ZW R . rugosa путем анализа случаев смены пола у эмбрионов Tg ZW. Мы наблюдали, что у ряда лягушек Tg ZW в разной степени развились маскулинизированные гонады, называемые ovotestis, что указывает на то, что фенотипический пол R . rugosa ZW frogs частично превращается из самки в самца, если у лягушек экспрессируется экзогенный трансген Z-AR . Эти данные привели нас к заключению, что Z AR участвует в определении пола самца у ZZ/ZW R . rugosa , но не является исключительной детерминантой пола у этой лягушки, поскольку кодирует функционирующий гормональный рецептор, который связывает андрогены, такие как Т и дигидротестостерон.

В этом исследовании мы успешно произвели KD ZW R . морщинистые лягушки. Это первый отчет, показывающий лягушку дикого типа, у которой ген-мишень был функционально подавлен. Ранее мы показали, что яичники R . Лягушки rugosa ZW трансформируются в семенники при обработке Т на стадии головастика [19], и что частичная смена пола от самки к самцу происходит у лягушек Wt ZW, если конститутивно экспрессируется трансген Z-AR [3] .Почему у лягушек Tg ZW не происходит полной смены пола? Возможно, недостаточное количество эндогенного Т доступно для транс-активации соответствующих родственных генов или для инициации генного каскада, необходимого для спецификации мужской судьбы. Недавно мы определили, что 0,2 нг/мл в воде для выращивания является пороговой дозой T для смены пола у R . морщинистая [16]. Когда головастикам Wt ZW давали развиваться в лягушек в воде, содержащей Т в количестве 0,02 нг/мл (одна десятая часть дозы), лягушки Tg ZW формировали семенники.Это указывает на то, что у лягушек Tg ZW развиваются семенники, когда T подается в воду для выращивания на стадии головастика, но не могут этого делать, если T не подается. Семенники с измененным полом у генетически самок лягушек продуцируют Vasa-позитивные, но Pat1a-негативные сигналы в зародышевых клетках, как в семенниках Wt ZZ, что указывает на то, что зародышевые клетки в гонадах Tg ZW, обработанных Т, полностью маскулинизированы.

Затем у лягушек pKD ZW развились семенники при лечении высокими дозами T на стадии головастика, а у лягушек KD ZW этого не произошло.У последних развились яичники при обработке высокими дозами Т, но они трансформировались в семенники у лягушек Wt ZW. Также следует упомянуть, что KD ZZ R . У rugosa у исследованных лягушек развились семенники при отсутствии лечения высокими дозами тестостерона на стадии головастика, что может быть связано с низкой скоростью мутагенеза. Это подтверждается тем фактом, что все WW R . rugosa эмбрионов, у которых ген W-AR едва экспрессируется, становятся летальными на стадии головастика [10].Вполне возможно, что смена пола от мужчины к женщине происходит в KD ZZ R . rugosa лягушек, если уровень андрогенов в половых железах самцов стал чрезвычайно низким. Таким образом, очевидно, что AR вместе с андрогенами может направлять индифферентные гонады на судьбу семенников у ZZ/ZW типа R . морщинистая . Насколько нам известно, это первое сообщение, показывающее, что рецептор стероидных гормонов может функционировать как детерминант мужского пола у некоторых видов позвоночных.

Ранее мы показали, что стероидогенные гены экспрессируются в индифферентных половых железах как самцов, так и самок R . rugosa головастиков [26]. Ген AR активируется в гонадах самцов перед определением пола у генетически самцов R . rugosa [10] и другие андрогены синтезируются в R . морщинистых семенников при дифференцировке гонад, чем в яичниках [11]. Таким образом, андрогены, достаточные для нормального определения мужского пола, могут быть синтезированы в индифферентных мужских гонадах R . морщинистая . Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить точные уровни андрогенов в гонадах самцов и самок Wt, что является довольно сложной задачей из-за небольшого размера гонад головастиков до определения пола.Тем не менее, из текущего исследования ясно, что андроген и его рецептор играют ключевую роль в генотипически запрограммированной детерминации мужского пола у этого вида.

Наконец, W AR ген R . rugosa , по-видимому, произошел от прототипа X AR корейского R . морщинистая [27]. Локус W AR расположен на инвертированной области W хромосомы японца R . rugosa [3, 8] и экспрессируется на крайне низком уровне в R . rugosa эмбриона по сравнению с Z-AR [10]. Таким образом, Z AR стали играть роль, возможно, критическую, учитывая его сигнальную функцию половых гормонов, в определении пола самцов в ZZ/ZW типа R . морщинистая . В этом отчете впервые представлены доказательства того, что эволюционная деградация гена W-AR приводит к вспомогательной роли Z AR вместе с андрогенами в определении мужского пола у земноводных.

Выводы

Ранее мы показали, что неполная смена пола от самки к самцу произошла у Z-AR трансгенных (Tg) самок ZW R . морщинистая лягушка. У самок AR -Tg ZW развился гибрид семенников и яичников, названный «овотестис». Однако самки лягушек AR -Tg сформировали семенники, когда в воду для выращивания головастиков вводили низкую дозу Т. В семенниках с измененным полом экспрессия генов Dmrt1 , AR и CYP17 , необходимых для маскулинизации, была значительно усилена.Затем мы произвели AR -knockdown (KD) самок лягушек ZW с помощью системы CRISPR/Cas9. Интересно, что у самок лягушек AR -KD ZW не наблюдалось смены пола, когда гонады обрабатывались дозами T, достаточно высокими, чтобы вызвать полную смену пола с самки на самца, даже у лягушек дикого типа. В женских гонадах AR -KD ZW экспрессия генов, необходимых для маскулинизации, не повышалась. Эти результаты показывают, что AR вместе с андрогенами может быть детерминантой мужского пола у амфибий.

Благодарности

Благодарим доктора Гэри Куинна за ценные предложения и советы.

Выводы, выводы и мнения, высказанные авторами в этом журнале, не обязательно отражают официальную позицию Министерства образования, науки и культуры Японии или аффилированных с автором учреждений.

Вклад авторов

  1. Концептуализация: МН.
  2. Финансирование приобретения: МН.
  3. Расследование: АО МК Ю.Н.
  4. Администрация проекта: МН.
  5. Ресурсы: SY TY EI.
  6. Надзор: МН.
  7. Письмо – первоначальный вариант: АО МН.
  8. Написание – рецензирование и редактирование: МН.

Каталожные номера

  1. 1. Уоллес Х, Бадави ГМИ, Уоллес БМН. Определение пола и реверсия пола у земноводных. Cell Mol Life Sci.1999 г.; 55: 901–909. пмид:10412371
  2. 2. Нисиока М., Ханада Х., Миура И., Руйзаки М. Четыре вида половых хромосом в Rana rugosa . Научная лаборатория Amphib Biol Hiroshima Univ. 1994 год; 13: 1–34.
  3. 3. Фуджи Дж., Кодама М., Ойке А., Мацуо Ю., Мин М.С., Хасебе Т. и др. Участие рецептора андрогена в определении пола у земноводных. ПЛОС ОДИН. 2014; 9: e93655. пмид:24826887
  4. 4. Сато Т., Мацумото Т., Ямада Т., Ватанабэ Т., Кавано Х., Като С.Позднее начало ожирения у самцов мышей с дефицитом андрогенных рецепторов (ARKO). Biochem Biophys Res Commun. 2003 г.; 300: 167–171. пмид:12480537
  5. 5. Yeh S, Tsai MY, Xu Q, Mu XM, Lardy H, Huang KE и др. Создание и характеристика мышей с нокаутом рецептора андрогена (ARKO): модель in vivo для изучения функций андрогенов в селективных тканях. Proc Natl Acad Sci USA. 2002 г.; 99: 13498–13503. пмид:12370412
  6. 6. Керкхофс С., Денайер С., Хэленс А., Классенс Ф.Мышиные модели с нокаутом и нокаутом андрогенных рецепторов. Дж Мол Эндокринол. 2009 г.; 42: 11–17. пмид:18

    0

  7. 7. Купман П., Губбай Дж., Вивиан Н., Гудфеллоу П., Лёвелл-Бэдж Р. Развитие самцов хромосомных самок мышей, трансгенных по Sry . Природа. 1991 год; 351: 117–121. пмид:2030730
  8. 8. Уно Ю., Нисида Г., Осима Ю., Йокояма С., Миура И., Мацуда Ю. и др. Сравнительное картирование хромосом генов, сцепленных с полом, и идентификация перестроек половых хромосом у японской морщинистой лягушки ( Rana rugosa , Ranidae) с системами половых хромосом ZW и XY.Хромосомный Рез. 2008 г.; 16: 637–647. пмид:18484182
  9. 9. Steinemann S, Steinemann M. Y-хромосома: рождена для уничтожения. Биоэссе. 2005 г.; 27: 1076–1083. пмид:16163733
  10. 10. Yokoyama S, Oshima Y, Tokita J, Suda M, Shinozuka T, Nakamura M. Андрогенный рецептор лягушки Rana rugosa : молекулярное клонирование и его характеристика. Джей Эксп Зоол. 2009 г.; 311А: 1–17.
  11. 11. Сакураи Н., Маруо К., Харагучи С., Уно Ю., Осима Ю., Цуцуи К. и др.Иммуногистохимическое обнаружение и биологическая активность CYP17 (P450c17) в индифферентных гонадах лягушки Rana rugosa . J Steroid Biochem Mol Biol. 2008 г.; 112: 5–12. пмид:18675354
  12. 12. Shen HC, Shanmugasundaram K, Simon NI, Cai C, Wang H, Chen S, et al. In Silico Открытие антагонистов рецепторов андрогенов, обладающих активностью в отношении резистентного к кастрации рака предстательной железы. Мол Эндокринол. 2012 г.; 26: 1836–1846. пмид:23023563
  13. 13. Guo X, Zhang T, Hu Z, Zhang Y, Shi Z, Wang Q и др.Эффективное РНК/Cas9-опосредованное редактирование генома у Xenopus tropicalis . Разработка. 2014; 141: 707–714. пмид:24401372
  14. 14. Шамуэй В. Этапы нормального развития Rana pipiens . I. Внешняя форма. Анат Рек. 1940 г.; 78: 139–147.
  15. 15. Тейлор AC, Коллрос JJ. Стадии нормального развития личинок Rana pipiens . Анат Рек. 1946 год; 94: 7–23. пмид:21013391
  16. 16. Ойке А., Кодама М., Накамура Ю., Накамура М.Пороговая доза тестостерона для смены пола от самки к самцу у лягушек Rana rugosa . Джей Эксп Зоол. 2016; 325А: 532–538.
  17. 17. Саотоме К., Хаяши К., Адачи Н., Накамура Ю., Накамура М. Структурные изменения в базальных мембранах гонад во время половой дифференциации у лягушки Rana rugosa . Джей Эксп Зоол. 2010 г.; 313А: 369–380.
  18. 18. Накамура Ю., Ивасаки Т., Умей Ю., Саотоме К., Накадзима Ю., Китахара К. и др. Молекулярное клонирование и характеристика специфичного для ооцитов Pat1a у лягушек Rana rugosa .Джей Эксп Зоол. 2015 г.; 323А: 516–526.
  19. 19. Иваде Р., Маруо К., Окада Г., Накамура М. Повышенная экспрессия P450c17 ( CYP17 ) во время формирования яичек у лягушки. Джен Комп Эндокринол. 2008 г.; 155: 79–87. пмид:17434514
  20. 20. Шибата К., Такасе М., Накамура М. Экспрессия Dmrt1 в половых гонадах земноводных. Джен Комп Эндокринол. 2002 г.; 127: 232–241. пмид:12225764
  21. 21. Синклер А.Х., Берта П., Палмер М.С., Хокинс Дж.Р., Гриффитс Б.Л., Смит М.Дж. и др.Ген из области, определяющей пол человека, кодирует белок, гомологичный консервативному ДНК-связывающему мотиву. Природа. 1990 г.; 346: 240–244. пмид:1695712
  22. 22. Мацуда М., Нагахама Ю., Шиномия А., Сато Т., Мацуда С., Кобаяши Т. и др. DMY представляет собой Y-специфический ген DM-домена, необходимый для развития самцов у рыб медака. Природа. 2002 г.; 417: 559–563. пмид:12037570
  23. 23. Takehana Y, Matsuda M, Myosho T, Suster ML, Kawakami K, Shin-I T, et al.Кооптация Sox3 в качестве определяющего самца фактора на Y-хромосоме у рыб Oryzias dancena . Община природы. 2014; 5: 4157. pmid:24948391
  24. 24. Smith CA, Roeszler KN, Ohnesorg T, Cummins DM, Farlie PG, Doran TJ, et al. Птичий Z-сцепленный ген DMRT1 необходим для определения мужского пола у цыплят. Природа. 2009 г.; 461: 267–271. пмид:19710650
  25. 25. Ёсимото С., Окада Э., Умемото Х., Тамура К., Уно Ю., Нисида-Умехара С. и др. Ген W-сцепленного DM-домена, DM-W , участвует в развитии первичного яичника у Xenopus laevis .Proc Natl Acad Sci USA. 2008 г.; 105: 2469–2474. пмид:18268317
  26. 26. Маруо К., Суда М., Йокояма С., Осима Ю., Накамура М. Экспрессия стероидогенных генов во время определения пола у лягушки, Rana rugosa . Джен Комп Эндокринол. 2008 г.; 158: 87–94. пмид:18550057
  27. 27. Ogata M, Lee JY, Kim S, Ohtani H, Sekiya K, Igarashi T и другие. Прототип половых хромосом обнаружен в корейской популяции Rana rugosa . Цитогенет Геном Res. 2002 г.; 99: 185–193.пмид:12

    3

(PDF) Результаты двух морфологических практических методов определения пола у японского перепела я! rr ‘

!’t;i:!’

ii,ir!

tiri,,

liiil

iiit,

il:i1′

fiffi’

:fi

.;

140

Энсаф А.Эт Футл и Мона С. Рагаб

Яап, Р.Г. (1938) «Конструкция тела живой рыночной индейки. Поулт. науч.

17:120-125.

Кауфра.а,-ф. (iqzfl.e» анализирует 9{-s91qal диморфизм размеров тела у

японских перепелов. Genetics 21:l ll’ll2′

Xona.n,’f-4. i»a’Sf,oii»*; Rl-{. (1955). Наследуемость некоторых .bod

измерений продуктивных характеристик у индеек. Poult. Sci. 34:

1262-t267.

t.rrru», iM (1937).!вес живой рульки

измерения , индюшат. науч. l8: 378-380′

N R C’iitto. Питательные вещества домашней птицы. Национальный исследовательский совет,

dfr te,ris.d ed. Nat. Acad. Press, Washington, D’C’ . . . —

pepin, b. .J «huiu..t»tittiis и половая классификация Red-

l»;;;dt;ttid ge’at hatihing- J.-Wi lt’ Manage’ .49 :228 -237′

Siop’s , f.-U. i»A W-ifr*, WO,itg7lP:tl»iilation пола кеклика

куропатки .'»‘;;;;;;7;»;it’,, «».*i,’,n.html. 2003 Последнее изменение: среда, 05-

-03 марта 1:48)

warr

il;ti ‘itriR.—jiO. n'»r.lnt»ed December 1996. Взято из «Raising

t»rr*rriil ii»»ii h»it»*. Для служебного использования», Clemson University Cooperative

Bobwhite Quail For

l)uuwrrll9 \

bxtension Strvice, Circular 5l4, by WS Walker ‘

W.Q Длина хвостовика для

определения пола у кекликов. Поулт. Sci’ 65:627-630′

,$-rl- I ii-*,ll c’P o’+I +s;l Ott$+L: o+il*J{‘Ej O’IiJJL 6. л!

.rr.,t r+- r,+ J &ll .uti tit*r:t

rJ+ll eJ — 691t$ i,’t+ — iolrll i$ — +rtsst At3i! р*’г

артJl j u-bj. 14 3ixll -rFS f fo ) : &tDtJ rYo S ,jtJl tj:t .»»S p=ir

Or.;U.UI LiL»Jl o. aJ$S AYY i -*’Jl irt3,1 ot’ rYA ‘Y\ rYI r\V (\ ‘ ‘$c- Gr-L\J

..J: .e1li :. *igrJ L3t lY -,yc s.(P<0,01) !j;- ' ir''r., Oc'i+ll iJJ+ ,-3Ul tl:U O!

i.,,l1 jsr L»li iq, ,S,’ i.ir cr:tS uj .pr Y t r- r,r’. | ?’-+t 3—+! JGii

» r;, , At * ,, Y i $c ,iUf dJLl l-lr c/’o Jl eH ii1 J’ll oiro-e ‘(%1o’1 &1i»

L—r; ;i ;, -t-:,::Ylr &.r-dl .rl*Y ire»,.F+ll +r=:l ii-i:’ &>L .+*l

J{J;.fr- .O=l rlri (..r.,.+Jr q.rr:l .s-.i oa;l uJtu3 ‘gjtrjl e!;t 6Y)-Jl ,r’! 1- «-:l

li .,,;r .rrt,-r * Jfl ;,f ]»i f_:ItTfr J*]], gJ,Hl

РЕЗУЛЬТАТЫ ДВУХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРАКТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛА У ЯПОНСКИХ ПЕРЕПЕЛКОВ

Эль Фулл, Э., Рагаб, М. (2005). РЕЗУЛЬТАТЫ ДВУХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРАКТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛА У ЯПОНСКИХ ПЕРЕПЕЛКОВ. Файюмский журнал сельскохозяйственных исследований и разработок , 19(1), 133-140. doi: 10.21608/fjard.2005.197805

Ensaf A. El Full; Мона С. Рагаб. «РЕЗУЛЬТАТЫ ДВУХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРАКТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛА У ЯПОНСКИХ ПЕРЕПЕЛОВ». Файюмский журнал сельскохозяйственных исследований и разработок , 19, 1, 2005, 133-140. doi: 10.21608/fjard.2005.197805

Эль Фулл, Э., Рагаб, М. (2005). «РЕЗУЛЬТАТЫ ДВУХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРАКТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛА У ЯПОНСКИХ ПЕРЕПЕЛОВ», Fayoum Journal of Agriculture Research and Development , 19(1), стр. 133-140. doi: 10.21608/fjard.2005.197805

Эль Фулл Э., Рагаб М. РЕЗУЛЬТАТЫ ДВУХ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРАКТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛА У ЯПОНСКИХ ПЕРЕПЕЛКОВ. Файюмский журнал сельскохозяйственных исследований и разработок , 2005 г.; 19(1): 133-140. doi: 10.21608/fjard.2005.197805

Статья 13 , Том 19, Выпуск 1, январь 2005 г., стр. 133-140 PDF (525.79 тыс.)
Тип документа: Исследовательские статьи.
DOI: 10.21608/fjard.2005.197805
Авторы
Энсаф А. Эль Фулл; Мона С. Рагаб
Поул. Произв. Отд. Факс. сельского хозяйства, Каирский университет, Фаюмский филиал.
Реферат
Измерения длины голени ≥35 мм для самок и <35
мм для самцов использовали для прогнозирования пола у японских перепелов в возрасте 10,
17, 28, 34, 31, 31, 31, 31 и 31 дней. возраста у 827 цыплят японского перепела.
Длина голени между полами различалась (P<0,01) уже в возрасте
лет в возрасте 17 дней и сохранялась после этого. Лучшее
предсказание пола было сделано в 24-дневном возрасте; точность предсказания для
женщин была выше, чем для мужчин (96,1 против 95,9%).
Этот метод требует только одного измерения голени, проведенного в возрасте
24 дней, и предоставляет заводчику надежный способ
разделения полов в целях маркетинга и селекции
производителей в относительно более раннем возрасте, особенно у белых пород.Был
второй метод определения пола по диморфизму оперения
(определение пола по перьям) с точностью 95% в 24-дневном возрасте.
Таким образом, либо длина голени, либо диморфизм пера могут предложить
достоверные методы разделения полов японских перепелов.
Ключевые слова
Морфологический; практические методы; определение пола; Японский перепел

Статистика

Просмотр статьи: 22

Скачать PDF: 24

Насколько на самом деле отличаются самцы и самки?

Генетическая информация, определяющая пол, содержится в половых хромосомах, которые бывают двух форм: X и Y.Люди с двумя X-хромосомами становятся женщинами, а те, у кого есть одна из них, становятся мужчинами. Половые хромосомы человека сильно различаются, Y-хромосома составляет лишь одну треть длины X-хромосомы, а определяющие пол гены, регулирующие развитие половых органов, находятся только на Y-хромосоме.

Дикая фугу © Наоки Мизуно

Подобные различия в последовательности ДНК также были подтверждены у мыши, и, хотя исследователи знали, что половые хромосомы человека могли быть крайним случаем, общепринятое мнение гласило, что определенный уровень различий существует в половых хромосомах большинства позвоночных.

Доцент Киёси Кикути и исследовательская группа из лаборатории рыболовства Высшей школы сельского хозяйства и естественных наук Токийского университета обнаружили, что расположение генов на X- и Y-хромосомах у фугу (тигрового фугу) Takifugu rubripes почти идентично. и у обоих есть копия определяющего пол гена «рецептора антимюллерова гормона типа II (Amhr2)». Пол фугу определяется разницей всего в один нуклеотид между этими двумя копиями Amhr2.

Этот результат исследования имеет важное значение, поскольку он показывает чрезвычайно простой пример определения пола, демонстрируя, что системы определения пола человека и мыши не являются универсальной моделью для всех позвоночных.

Фугу занимает важное место в японской кухне. В дополнение к важности этого открытия как основного результата исследования, оно может привести к разработке удобного метода определения пола фугу, который поможет сохранить экосистему, в которой живут фугу, и защитить фугу в дикой природе.

Department release/press release (Japanese)

Paper

Takashi Kamiya, Wataru Kai, Satoshi Tasumi, Ayumi Oka, Takayoshi Matsunaga, Naoki Mizuno, Masashi Fujita, Hiroaki Suetake, Shigenori Suzuki, Sho Hosoya, Sumanty Tohari, Sydney Brenner, Toshiaki Miyadai, Byrappa Venkatesh, Yuzuru Suzuki, Kiyoshi Kikuchi,

“A Trans-Species Missense SNP in Amhr2 Is Associated with Sex Determination in the Tiger Pufferfish, Takifugu rubripes (Fugu),”

PLoS Genetics 8 2012: e1002798, doi:10.1371/journal.pgen.100279

Ссылка на статью

Ссылки

Высшая школа сельского хозяйства и наук о жизни

Лаборатория рыболовства (японский)

Недавно обнаруженный механизм определения пола может привести к улучшению методов разведения рыбы — ScienceDaily

Совместная исследовательская группа Университета Кумамото (Япония) обнаружила, что активация PPARα, рецептора жирных кислот, который обнаруживает жирные кислоты в клетках и регулирует физиологические функции , вызывает маскулинизацию японской рисовой рыбы (медака).Ожидается, что открытие этого молекулярного механизма будет способствовать развитию новых технологий контроля над сексом.

Пол млекопитающих определяется их генами, а именно XX/XY комбинацией половых хромосом. С другой стороны, на определение пола рыб, амфибий и рептилий большое влияние оказывает температура окружающей среды. Однако медака ( Oryzias latipes ) является костной рыбой, которая использует уникальную систему определения пола XX/XY. Ген, определяющий пол, DMY, был недавно идентифицирован на их Y-хромосоме.Обычно люди XY с геном ДМИ дифференцируются в мужчин, а люди ХХ (без ДМИ) дифференцируются в женщин. Однако, если медаку разводить в воде с температурой 32—34°С в период половой дифференциации, XX особей будут дифференцироваться в самцов. Другими словами, на их генетическое определение пола влияет температура. Предыдущее исследование Университета Кумамото показало, что кортизол, гормон стресса, вызываемый высокой температурой, непосредственно действует на гонады и вызывает маскулинизацию XX medaka (Hayashi et al ., 2010; Yamaguchi и др. ., 2010; Kitano и др. ., 2012). Однако молекулярный механизм маскулинизации кортизола не был определен.

В этом исследовании исследователи провели анализ секвенирования РНК для поиска генов, активируемых высокой температурой или кортизолом. Было обнаружено много генов, связанных с рецептором жирных кислот «рецептором, активируемым пролифератором пероксисом альфа» (PPARα), и когда активатор PPARα вводили личинкам медаки, XX медака становился самцом.Более того, при получении нокаут-медаки с ингибированной функцией PPARα дифференцировка в самцов полностью подавлялась даже после введения кортизола или активатора PPARα. Насколько известно исследователям, это первый случай, когда было показано, что активация PPARα так тесно связана с дифференциацией пола медака кортизолом или активатором.

«В рыбоводстве для производства продуктов питания, таких как камбала или угорь, востребована технология, позволяющая выращивать только самок, потому что они растут быстрее, чем самцы», — сказал руководитель исследования профессор Такеши Китано.«Здесь мы раскрыли молекулярный механизм, который вызывает дифференциацию в мужчин, и мы надеемся, что в будущем будут разработаны новые технологии сексуального контроля, использующие этот механизм».

Источник истории:

Материалы предоставлены Университетом Кумамото . Примечание. Содержимое можно редактировать по стилю и длине.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.

2022 © Все права защищены.